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キナーゼシグナルの活性制御を行うユビキチン・脱ユビキチン化酵素の網羅的同定

全面鉴定调节激酶信号活性的泛素/去泛素化酶

基本信息

批准号：
22659017
负责人：
松沢厚
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

最近、ユビキチン化修飾・脱修飾酵素により、キナーゼシグナルの活性化のタイミング・持続時間・強さ・場所といった質的変化が調節制御される可能性が示唆され、キナーゼシグナルとユビキチン化の両シグナル経路のクロストークが注目されているが、どのユビキチン化・脱ユビキチン化酵素が個々のキナーゼ分子の活性制御を行うのか、その対応関係は不明である。本研究では、個々のキナーゼの活性制御に特異的なユビキチン化・脱ユビキチン化酵素を同定するためのスクリーニング系を確立し、同定した酵素の機能解析により、ユビキチン化による新たなシグナル制御機構と生理機能の解明を目的としている。今年度は、個々のキナーゼシグナルの活性制御を行う特異的ユビキチン化・脱ユビキチン化酵素を網羅的に同定するため、まず、キナーゼ分子やその制御因子の蛋白質分解とユビキチン化を指標としたスクリーニング系を確立することを目指した。個々の生細胞レベルでのライブイメージング解析を用い、生細胞での蛋白質分解やユビキチン化といった分子レベルでの動的変化を経時的に定量でき、短時間で客観性の高い統計的定量法によるスクリーニングが可能な系を構築した。この系とユビキチン関連分子に絞ったsiRNAライブラリーを用いて、実際に目的のキナーゼに対してスクリーニングを完了した。その結果、目的のキナーゼの分解制御に関わる新たなユビキチン化酵素を幾つか同定することができた。現在、同定したユビキチン化酵素の機能解析を進めると共に、それ以外の別なキナーゼに対して、構築したスクリーニング系の応用についても検討している。

Recently, ユビキチン chemical modification, modification enzyme off により, キナーゼシグナルの activeness のタイミング · 続 time, strong さ, place といった qualitative variations change が adjustment suppression されがる possibility in stopping され, キナーゼシグナルとユビキチン change の struck シグナル経 road のクロストークが attention されているが, どのユビキチン change, take off ユビキチン phenoloxidase が a 々のキナーゼ molecular の active suppression を line うのか, その応 seaborne masato is unknown はである. This study では, a 々のキナーゼの active suppression に specific なユビキチン change, take off ユビキチン phenoloxidase を with fixed するためのスクリーニングしを established, with fixed しのた enzyme function analytical により, ユビキチン change による new たなシグナル system of the royal institution と physiology の interpret を purpose としている. Our は ", a 々のキナーゼシグナルの active suppression を line う specific ユビキチン change, take off ユビキチン phenoloxidase を snare に with fixed するため, まず, キナーゼ molecular やその suppression factor の protein decomposition とユビキチン change を index としたスクリーニンをグ department establish することを refers した. A 々の living cells レベルでのライブイメージング parsing をい, living cells での protein decomposition やユビキチン change といった molecular レベルでの dynamic variations of the を経に when quantitative でき, high short time ので guest 観い quantitative method of statistical によるスクリーニングが may have な department を build した. この is とユビキチン masato even molecular に ground った siRNA ライブラリーを with いて, be interstate に purpose のキナーゼにし seaborne てスクリーニングを finished した. その results, purpose のキナーゼの decomposition suppression に masato わる new たなユビキチン phenoloxidase を several つか with fixed することができた. Now, with the constant したユビキチン phenoloxidase の function analytical を into めるとに, それ outside の don't なキナーゼにし seaborne て, constructing したスクリーニング is の応 with についても beg し検ている.