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Identification of pathogenic domain in TDP-43 for ALS toward the antibody medicine

TDP-43中针对抗体药物的ALS致病域的鉴定

基本信息

批准号：
23300131
负责人：
URUSHITANI Makoto
金额：
$ 12.81万
依托单位：
Kyoto University (2013)Shiga University of Medical Science (2011-2012)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Using structural analyses of RNA-recognition motifs (RRM) of TDP-43, a ALS-linked protein, we identified a aberrant assembly interface in RRM1. The cysteine in the this region induced TDP-43 aggregates, cytosolic mislocalization, the incompetent RNA splicing, and cytotoxicity, which functionally and structurally mimicks TDP-43 proteinopathy. We also succeeded in cloning cDNA from murine hybridoma (3B12A), generating a monoclonal antibody recognizing the misofolded forms of TDP-43, and constructed mammalian expression plasmid for the single chain Fv (scFv). Since the commercially available transgenic mice expressing ALS-linked mutant TDP-43 (A315T) turned out to fail to replicate ALS phenotype, we newly establish the embryonic brain transfection system, using in-utero electroporation. The brain slice expressing aggregate prone mutant TDP-43 showed ALS-like TDP-43 aggregates, which could be tested to estimate the intrabody therapy.

通过对ALS连锁蛋白TDP-43的RNA识别基序(RRM)的结构分析，我们发现RRM1中存在一个异常的组装界面。该区域的半胱氨酸导致TDP-43聚集、胞浆定位错误、RNA剪接功能障碍和细胞毒性，在功能和结构上与TDP-43蛋白病变相似。我们还成功地从小鼠杂交瘤(3B12A)中克隆出了识别TDP-43错折叠形式的单抗，并构建了单链抗体(ScFv)的哺乳动物表达载体。由于商业上可获得的表达ALS连锁突变体TDP-43(A315T)的转基因小鼠不能复制ALS表型，我们新建立了利用宫内电穿孔的胚胎脑转基因系统。表达凝集倾向突变体TDP-43的脑片显示类似ALS的TDP-43聚集体，可以用来评估体内治疗。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

TDP-43の核外脱出シグナル内に存在する酸性アミノ酸がその構造と機能維持に及ぼす役割について

TDP-43核出口信号中存在的酸性氨基酸在维持其结构和功能中的作用

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
Pan;L.;Otomo;A.;Abe;K.;Ogawa;H.;Chiba;T.;Koike;M.;Uchiyama;Y.;Aoki;M.;Yoshii;F.;Ishii;T.;Yanagawa;T.;and Hadano;S.;漆谷真，小代明美，綾木孝，藤原範子，伊東秀文
通讯作者：
漆谷真，小代明美，綾木孝，藤原範子，伊東秀文

トランスグルタミナーゼ２によるSOD1オリゴマー形成を標的にしたALSモデルマウスの治療解析

转谷氨酰胺酶 2 靶向形成 SOD1 寡聚体的 ALS 模型小鼠治疗分析