Elucidation of the structural basis of the excitation and contraction coupling usiing phase-contrast electron cryotomography

使用相衬电子冷冻断层扫描阐明激发和收缩耦合的结构基础

• 批准号: 23570150
• 负责人: MURATA Kazuyoshi
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23570150/
• 关键词: 高分解能電子顕微鏡解析; 膜タンパク質; 興奮収縮連関; クライオ電子顕微鏡; 電子線トモグラフィー

We extracted enzymatically-active triad membranes from rabbit's skeletal muscle and examined them using electron cryomicroscopy. A lot of proteoliposomes were successfully observed in the sample. Some of them were identified as sarcoplasmic reticulum (SR). We further labeled the dihydropyridine receptor (DHPR) in T-tubules using the anti-beta subunit antibody conjugated fluorescent dyes and gold colloids to detect the triad junction (TJ). Although we can find gold-labels near SRs, The region of TJ has not been found out yet. We will also reconsider the condition of membrane extraction to preserve TJ abundantly, and examine it again in the future.

我们从兔骨骼肌中提取了具有酶活性的三联膜，并用电子冷冻显微镜对其进行了观察。在样品中成功观察到大量的蛋白质脂质体。其中一些为肌浆网(SR)。我们进一步用抗β亚基抗体结合的荧光染料和胶体金标记法标记T小管中的二氢吡啶受体(DHPR)以检测三联体连接(TJ)。虽然我们在SRS附近发现了金标，但TJ地区尚未被发现。我们还将重新考虑膜提取的条件，以丰富保存TJ，并在未来再次进行检查。

项目成果

骨格筋トライアドジャンクションの三次元構造解析

骨骼肌三联体连接的三维结构分析

• 发表时间: 2013
• 期刊: 生理学研究所年報
• 作者: 村田和義;國安明彦
• 通讯作者: 國安明彦

Seeing the Portal in Herpes Simplex Virus Type 1 B Capsids

• DOI: 10.1128/jvi.01663-10
• 发表时间: 2011-02-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Rochat, R. H.;Liu, X.;Chiu, W.
• 通讯作者: Chiu, W.

Three-dimensional evaluation of the spinal local neural network revealed by the high-voltage electron microscopy: a double immunohistochemical study

• DOI: 10.1007/s00418-012-0976-6
• 发表时间: 2012-10-01
• 期刊: HISTOCHEMISTRY AND CELL BIOLOGY
• 影响因子: 2.3
• 作者: Oti, Takumi;Satoh, Keita;Sakamoto, Hirotaka
• 通讯作者: Sakamoto, Hirotaka

クライオ位相差電顕トモグラフィーによる興奮収縮連関の構造的基盤の解明

使用冷冻相差电子显微镜断层扫描阐明激发-收缩耦合的结构基础

• 发表时间: 2013
• 期刊: 生理学研究所年報
• 作者: 村田和義;國安明彦
• 通讯作者: 國安明彦

An archaeal homolog of proteasome assembly factor functions as a proteasome activator.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0060294
• 发表时间: 2013
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Kumoi K;Satoh T;Murata K;Hiromoto T;Mizushima T;Kamiya Y;Noda M;Uchiyama S;Yagi H;Kato K
• 通讯作者: Kato K