Development of an efficient transformation and gene expression system for a fastidi-ous oral anaerobe

开发针对挑剔的口腔厌氧菌的有效转化和基因表达系统

• 批准号: 23592722
• 负责人: NISHIKAWA Kiyoshi
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23592722/
• 关键词: 嫌気性口腔細菌; タンネレラ・フォーサイシア; ポルフィロモナス・ジンジバリス; 遺伝子導入; 発現ベクター; 薬剤耐性カセット; ナチュラルコンピテンス; バイオフィルム; 歯周病原細菌; 遺伝子破壊; 自然形質転換; クロラムフェニコール耐性; 共用ベクター; 遺伝子導入法; 薬剤耐性マーカー; エレクトロポレーション; 制限修飾系

A comF-dependent natural competence has been discovered for the first time in an important periodontal pathogen, Tannerella forsythia. Keeping T.forsythia in a biofilm throughout the pr-ocedure allowed efficient DNA uptake and allelic replacement. Based on this finding, a simple method has been established for efficient targeted mutagenesis in T.forsythia. One of the critical conditions affect-ing the efficiency of transformation is the freshness of biofilm, and the recommended subculture duration of input biofilm is 4 days just before transformation. Furthermore, an autonomous chloramphenicol-resista-nt CAT cassette, permF-CAT, has been constructed and successfully applied to T.forsythia. Using permF-CAT, a final version of the common expression vector has been designed which should be functional not only in T.forsythia but also in the other Red Complex anaerobes.

首次在一种重要的牙周病病原体Tannerella patienthia中发现了一种依赖于comF的天然能力。 在整个发病前将嗜热厌氧菌保持在生物膜中允许有效的DNA摄取和等位基因替换。 基于这一发现，一个简单的方法已经建立了有效的靶向诱变T.影响转化效率的关键条件之一是生物膜的新鲜度，建议转化前4 d为接种生物膜的继代时间。此外，一个自主的氯霉素抗性CAT盒，permF-CAT，已被构建并成功地应用于T. acetthia。使用permF-CAT，已经设计了共同表达载体的最终版本，其不仅在嗜热厌氧菌中而且在其他红色复合厌氧菌中应该是功能性的。

项目成果

A simple mutagenesis using natural competence in Tannerella forsythia

利用连翘坦纳菌的自然能力进行简单诱变

• DOI: 10.1016/j.mimet.2013.07.011
• 发表时间: 2013
• 期刊: Journal of Microbiological Methods
• 影响因子: 2.2
• 作者: Kiyoshi Nishikawa;Yoshinobu Tanaka
• 通讯作者: Yoshinobu Tanaka

Natural competence of Tannerella forsythia: application to the insertional mutation of a two-component system-related gene.

连翘坦纳菌的自然能力：应用于二元系统相关基因的插入突变。

• 作者: 三島弘幸;井上昌子;門田理佳;服部淳彦;鈴木信雄;筧光夫;松本敬;里村一人;見明康雄;山根一芳,南部隆之,真下千穂,山中武志,福島久典;Kiyoshi Nishikawa
• 通讯作者: Kiyoshi Nishikawa

Natural competen- ce of Tannerella forsythia : application to the insertional mutation of a two-component system-related gene、Abstract No.4LBA-0704

连翘坦纳菌的天然能力：二元系统相关基因插入突变的应用，摘要号4LBA-0704

• 发表时间: 2012
• 作者: Yano S;Kitamura K;Satoh Y;Nakano M;Hattori A;Sekiguchi T;Ikegame M;Nakashima H;Omori K;Hayakawa K;Chiba A;Sasayama Y;Ejiri S;Mikuni-Takagaki Y;Mishima H;Funahashi H;Sakamoto T;Suzuki N;吉田康夫,今村隆子,須和部京介,加藤裕久,吉村文信;Kiyoshi Nishikawa
• 通讯作者: Kiyoshi Nishikawa