膵癌切除後のAdjuvant Cytokine Gene Therapy-ハムスター膵管癌を用いた基礎的研究-

胰腺癌切除后的辅助细胞因子基因治疗 - 使用仓鼠胰腺导管癌的基础研究 -

• 批准号: 09877246
• 负责人: 田中 雅夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877246/
• 关键词: GM-CSF; IFN-γ; MCP-1; 遺伝子治療; アデノウイルス; 膵癌; ハムスター

我々は予後が極めて不良な膵癌に対する免疫遺伝子治療に取り組んでおり、これまでに以下の成果をあげた。(1)in vitroにおけるサイトカイン発現の確認:ハムスター膵癌細胞に各組換えウイルス(IFN-γ、GM-CSF,MCP-1)をMOI 0、10、50、100の感染効率で感染させ毎日、7日後まで上清を採集、ELISAにてサイトカインの放出量を測定した、各サイトカインはMOI依存性に腫瘍細胞より放出され、3目目に最高レベルで放出され1週間後には極少量となった。(2)放出されるサイトカインの生物学的測定:IFN-γはvesicular stomatitis virus plaque inhibition assay, GM-CSFはマウス骨髄細胞を用いたcolony forming assay,MCP-1に対してはTHP-1 細胞(human monocyte)を用いた。chemotaxis assayにより測定した。放出された各サイトカインは生物学的活性をもつことが証明された。(3)in vitroにおける腫瘍増殖:24穴プレートの各wellに2x10^3個の細胞をまき2日後にウイルスをMOI0,10,50,100で感染させ細胞数を各群3穴ずつ、24時間おきに4日後まで計測した。IFN-γのみ腫瘍増殖をMOI依存性に抑制した。(4)in vivoにおける腫瘍増殖:6穴プレートに各ウェル1x105の腫瘍細胞をまき2日後にウイルスをMOI 100の感染効率で感染させ2時間後に100Gyのγ線照射を行い、その翌日ハムスターに腫瘍ワクチンとし1x10^6個の細胞を皮下に注入(n=10)、7日後に1x10^5個のγ線照射を行っていない腫瘍細胞を皮下にチャレンジした。腫瘍ワクチンの実験系においては、GM-CSFが1ヶ月後に95%の抗腫瘍効果を及ぼした。MCP-1及びIFN-γは効果が認められなかった。皮下移植腫瘍にてGM-CSFに抗腫瘍効果が認められたので、in vivoでの肝転移に対する効果についてGM-CSF遺伝子組換えウイルスを用いて現在検討中である。

After I 々 は to が extremely め て bad な Cui carcinoma に す seaborne る immune heritage 伝 son treatment group take り に ん で お り, こ れ ま で に の results under を あ げ た. (1) the in vitro に お け る サ イ ト カ イ ン 発 の now confirmed: ハ ム ス タ ー Cui cancer に groups in え ウ イ ル ス (IFN - gamma, gm-csf, MCP - 1) を MOI 0, 10, 50, 100 の infection rate of unseen で infection さ せ, 7 days after their ま で supernatant を collection, ELISA に て サ イ ト カ イ ン を の release quantity determination し た, various サ イ ト カ イ ン は MOI dependency に swollen sores cells よ り release さ れ, 3 mesh mesh に highest レ ベ ル で release さ れ after 1 week between に は tiny と な っ た. (2) Release the されるサ トカ トカ <e:1> <s:1> biological assay :IFN-γ トカ vesicular stomatitis virus plaque inhibition assay GM-CSF <s:1> ウス bone marrow cells を were treated with a <s:1> たcolony forming assay, and MCP-1に was used against <s:1> て を THP-1 cells (human monocyte)を with た た. chemotaxis assayによ measure the た. Release the biological activities of された, サ, トカ, <s:1>,, された, を,, とが to prove された. (3) the in vitro に お け る swollen sores rights of the 24 hole プ レ ー ト の each well に 2 x10 ^ 3 の cells を ま き 2 later に ウ イ ル ス を MOI0, 10,50,100 で infection さ せ cell number を each group of three point ず つ, 24 time お き に 4 later ま で measuring し た. IFN-γ み abscess proliferation を moi-dependent に inhibition た た. (4) the in vivo に お け る swollen sores rights) of 6 holes プ レ ー ト に each ウ ェ ル 1 x105 の swollen sores cells を ま き 2 later に ウ イ ル ス を MOI 100 の infection rate of unseen で infection さ せ 2 time after 100 gy に の を い, gamma irradiation そ の next ハ ム ス タ ー に swollen sores ワ ク チ ン と し 1 x 10 ^ 6 cells の を subcutaneous に injection (n = 10), 1 x10 7 に later ^ 5 の を line of gamma irradiation っ て い な い swollen sores を subcutaneous に チ ャ レ ン ジ し た. Department of swollen sores ワ ク チ ン の be 験 に お い て は, gm-csf が ヶ 1 month after に 95% の resistance swollen sores unseen fruit を and ぼ し た. The effects of MCP-1 and びIFN-γ are が recognized in められな った った. Subcutaneous transplantation swollen sores に て gm-csf に resistance swollen sores unseen fruit が recognize め ら れ た の で, the in vivo で の liver planning move に す seaborne る unseen fruit に つ い て gm-csf heritage 伝 subgroups in え ウ イ ル ス を with い て now 検 please で あ る.