トキソプラズマ原虫の潜伏感染を制御する原虫プロテインキナーゼの機能解析

控制弓形虫潜伏感染的原生动物蛋白激酶的功能分析

• 批准号: 11J02037
• 负责人: 杉 達紀
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J02037/
• 关键词: トキソプラズマ; プロテインキナーゼ; 細胞分裂周期; 細胞分化; 潜伏感染

TgMAPK1がトキソプラズマの生態に果たす役割を解析するために、TgMAPK1の染色体位置上に変異を導入した。発現誘導が可能である、Destabilizing Domain (DD)タグをタンパク質N-末に融合した形で発現するように組換に成功した。DDタグが付加されたTgMAPK1はDDタグの低分子リガンドであるshield-1存在下において、濃度依存的にタンパク質の蓄積量の増加した。Shield-1の処理により強発現となったDDタグ融合TgMAPK1は原虫の生育を止めたことから、DD-TgMAPK1がDDタグの存在により機能を損なっていることが示唆された。HAタグをN末に付加したTgMAPK1に種々の変異を導入した配列により、原虫が持つTgMAPK1位置でノックインした原虫を作成した。低分子化合物であるBKIの一つである1NM-PP1による感受性が変化する感受性決定アミノ酸位置が、G, A, T, F, Yのそれぞれのアミノ酸に置換された変異体を作出した。Alanineを感受性決定アミノ酸に持つTgMAPK1をコードする組換原虫RH/TgMAPK1Aは、1NM-PP1により低濃度(100nM以下)で増殖が阻止されたのに対して、Tyr。sineを持つTgMAPK1をコードする組換原虫RH/TgMAPK1Yは耐性を獲得していた。1NM-PP1処理時において、核のDNA量の変化についてフローサイトメトリーで観察した。その結果RH/TgMAPK1AとRH/TgMAPK1Yともにゲノム複製の完了を示す細胞内DNA量2Nまでは相違なく進んだが、RH/TgMAPK1A (1NM-PP1感受性株)においては核分裂および細胞分裂期の進行を示す1NのDNA量を持った細胞が減少した。これは、TgMAPK1がDNA合成以降の細胞周期の中でチェックポイントとして働いていることを示唆している。

TgMAPK1 is introduced into the chromosome position of the chromosome. Discovery induction is possible, Destroying Domain (DD) is possible, and the transformation is successful. TgMAPK1 increases in the presence of shield-1, which increases the accumulation of TgMAPK 1 in the presence of shield-1. Shield-1 is a powerful fusion protein, TgMAPK-1 is a protozoan, DD-TgMAPK-1 is a protozoan, DD-TgMAPK-1 is a protozoan, and DD-TgMAPK-1 is a protozoan. HA is the last to be added to TgMAPK1. The difference is introduced into the array. The protozoa are maintained at the TgMAPK1 position. Low molecular weight compounds: BKI, 1NM-PP, 1NM-PP, NM-PP, 1 NM-PP, NM-PP, Alanine sensitivity determines the presence of TgMAPK1 in the medium and the presence of RH/TgMAPK1A and 1NM-PP1 in the medium at low concentrations (below 100nM). Sine MAPK 1 is the most important component of RH/TgMAPK 1 1NM-PP1 treatment time, nuclear DNA quantity change, detection The results showed that RH/TgMAPK1A and RH/TgMAPK 1Y could not replicate completely, but the DNA content in cells decreased gradually. RH/TgMAPK1A (1NM-PP1 susceptible strain) could not replicate completely, but the DNA content in cells decreased continuously. TgMAPK1 is synthesized to reduce the cell cycle.

项目成果

化学的無作為変異導入によるBKI抵抗性のトキソプラズマ原虫の作成と性状解析

通过化学随机突变引入抗 BKI 弓形虫的创建和表征

• 发表时间: 2011
• 作者: Yuji Odaka;Takuzo Okada;杉 達紀;岡田拓三;杉達紀;岡田拓三;岡田拓三;杉達紀;岡田拓三;杉達紀;岡田拓三;杉達紀
• 通讯作者: 杉達紀

トキソプラズマ原虫のMAPK1はブラディソイトスイッチを如何に制御するか

弓形虫MAPK1如何控制缓慢体开关？

• 发表时间: 2012
• 作者: Yuji Odaka;Takuzo Okada;杉 達紀
• 通讯作者: 杉 達紀

トキソプラズマ原虫潜伏感染誘導に関わる原虫プロテインキナーゼシグナルの解析

弓形虫潜伏感染诱导中涉及的原生动物蛋白激酶信号分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 杉 達紀;堀本 泰介;加藤 健太郎;河村由文;杉 達紀
• 通讯作者: 杉 達紀

トキソプラズマの潜伏感染を誘導するBKIの効果はCDPK1の阻害によるものか?

BKI诱导弓形虫潜伏感染的作用是否是由于抑制了CDPK1？

• 发表时间: 2011
• 作者: Yuji Odaka;Takuzo Okada;杉 達紀;岡田拓三;杉達紀;岡田拓三;岡田拓三;杉達紀
• 通讯作者: 杉達紀

Identification of mutations in TgMAPK1 of Toxoplasma gondii conferring resistance to 1NM-PP1.

• DOI: 10.1016/j.ijpddr.2013.04.001
• 发表时间: 2013-12
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL FOR PARASITOLOGY-DRUGS AND DRUG RESISTANCE
• 影响因子: 4
• 作者: Sugi, Tatsuki;Kobayashi, Kyousuke;Takemae, Hitoshi;Gong, Haiyan;Ishiwa, Akiko;Murakoshi, Fumi;Recuenco, Frances C.;Iwanaga, Tatsuya;Horimoto, Taisuke;Akashi, Hiroomi;Kato, Kentaro
• 通讯作者: Kato, Kentaro