マツカワメラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性

松川黑皮质素受体 (MCR) 异聚体形成的可能性

基本信息

批准号：
11J06342
负责人：
小林勇喜
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

【Xenopus tropicalisを用いたメラニン凝集ホルモン(MCH)システムの解明】これまでに、X. tropicahsから4種類のメラニン凝集ホルモン受容体(XMCHR1a、1b、2a、2b)をクローン化し、細胞内シグナルを指標に受容体機能を精査した。その結果、MCHR2bのみCa^<2+>濃度、GTPγS結合能、ERK及び70S6Kリン酸化、cAMP量測定の全てにおいて、活性は認められなかった。そこで、CHO-K1細胞を用いてXMCHR2bの細胞内局在を免疫化学染色により調べたところ、他のXMCHRsと同様に細胞膜上に局在していた。さらに、XMCHRのリガンドであるXMCHを添加し、細胞内局在を調べたところ、XMCHR2bのインターナリゼーションが認められた。以上より、XMCHR2bは一般的な細胞内シグナルを活性化しないが、機能的な受容体だと考えられる。このような特徴を有するMCHRの報告は本研究が初である。興味深いことに、XMCHR2bはX. tropicalisのほぼ全ての組織で発現する。中でも、皮膚ではXMCHR1bと共に体色調節に関わる可能性を昨年度明らかにした。そこで、XMCHR1bとXMCHR2bの関係を探るべく、両受容体をCHO-K1細胞に共導入し、免疫化学染色を行った。その結果、XMCHR1bとXMCHR2bの多くが細胞膜上で共発現すること、XMCH添加により、両者のほとんどが共にインターナリゼーションすることを認めた。よって、X. tropicalisの皮膚では、XMCHR1bとXMCHR2bが相互的(2量体形成等)に体色調節に関与すると考えられる。しかしながら、少数認められたXMCHR2bの単独での挙動については謎である。【マツカワ・メラノコルチン受容体(MCR)のヘテロマー形成の可能性】昨年度までに、マツカワMC1RとMC5Rがヘテロダイマーを形成する可能性を示す多くのデータを得た。本年度は残された課題であった免疫沈降法による生化学的解析を行い、MC1Rの免疫沈降画分にMC5Rも検出されることを明らかにした。さらに、フローサイトメトリー解析により、CHO細胞発現系では、MC1RとMC5Rの極一部がヘテロダイマーを形成していることを明らかにした。

[使用Xenopus tropicalis了解黑色素聚集激素（MCH）系统]迄今为止，已经从X. tropicahs中克隆了四种类型的黑色素聚集激素受体（XMCHR1A，1B，2A，2B），并使用了使用内部信号的X. tropicahs进行了X. tropicahs和指标。结果，在所有CA^<2+>浓度，GTPγS结合能力，ERK和70S6K磷酸化和CAMP量测量中均未观察到活性。因此，使用免疫化学染色使用CHO-K1细胞检查了XMCHR2B的细胞内定位，并且与其他XMCHR相似，它位于细胞膜上。此外，添加了XMCH的XMCH，添加了XMCHR的配体以检查亚细胞定位，并观察到XMCHR2B的内在化。基于上述，XMCHR2B不会激活一般的细胞内信号，而是被认为是功能受体。这项研究是具有此类特征的MCHR的第一份报告。有趣的是，XMCHR2B几乎在X. tropicalis的几乎所有组织中表达。特别是，去年我们揭示了皮肤与XMCHR1B一起参与体色调节的可能性。因此，为了探索XMCHR1B和XMCHR2B之间的关系，将两个受体共同引入了CHO-K1细胞，并进行了免疫化学染色。结果，发现许多XMCHR1B和XMCHR2B在细胞膜上共表达，并且两者中的大多数通过添加XMCH进行了内部化。因此，在X. topicalis皮肤中，XMCHR1B和XMCHR2B被认为与体色相互调节（例如二聚体形成）。但是，仅XMCHR2B的少数行为是一个谜。截至去年，我们获得了大量数据，表明Matsukawa MC1R和MC5R形成异二聚体的可能性。今年，使用免疫沉淀进行了生化分析，这是剩下的问题，并揭示了MC1R的免疫沉淀分数也检测到了MC5R。此外，流式细胞仪分析表明，在CHO细胞表达系统中，MC1R和MC5R形成异二聚体的一小部分。