口腔扁平上皮癌における転写因子RUNX3の役割とその発現制御機構解析

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本研究の対象である転写因子RUNX3は多くの固形癌において癌抑制遺伝子として知られているが、これまでに我々は、口腔癌においては、その過剰発現より逆に癌の悪性形質を促進することを見出してきた。我々の発表論文に続いて皮膚癌、悪性黒色腫、卵巣癌でも同様な報告がなされている。本年度は転写因子RUNX3の口腔癌におけるさらなる役割やメカニズムの詳細及び予後に与える影響をより詳細に明らかにすることを目的とし、研究を行った。1. RUNX3の下流に働く遺伝子の同定我々はRUNX3がRUNX familyと呼ばれる転写因子群に属すことから、標的遺伝子の転写を実際に制御することで機能すると仮定した。RUNX3の発現の低い口腔癌細胞株にRUNX3を遺伝子導入し、安定性にRUNX3を高発現する細胞株と親株の遺伝子発現を網羅的にマイクロアレイ法にて解析した。この2つの遺伝子発現プロファイルを比較し、発現変動を示すものをRUNX3標的遺伝子候補とした。これらのなかでもRUNX3の機能に関与すると考えられるもの、また種々の口腔癌細胞株でのRUNX3の発現と相関関係にあるものを絞り込み、下流遺伝子としてIGFBP2 (insulin-like growth factor binding protein 2)を同定した。2. RUNX3トランスジェニックマウスの作製昨年度までに上皮特異的なRUNX3トランスジェニックマウスを作製した。本年度はこのトランスジェニックマウスを継続的に飼育し、自然発癌をモニターした。結果、長期的な飼育のみでは野生型、RUNX3トランスジェニックマウスともに自然発癌を生じることはなかった。3. RUNX3の口腔癌における役割の解明口腔癌の予後に影響を与える因子として、痛細胞の上皮間葉移行が知られている。種々の口腔癌細胞株におけるRUNX3の発現は癌細胞の上皮間葉移行の状態とよく相関していた。そこで、RUNX3は上皮間葉移行に何らかの影響を与えると仮定し、TGF-βにより誘導される上皮間葉移行モデルにおいてRUNX3の発現の検討を行ったところ、上皮間葉移行初期に発現上昇し、後期には発現低下することを見出した。このモデルにおいて、siRNAを用いたRUNX3の発現抑制を行うと、上皮間葉移行が部分的に阻害された。