In vitro reconstitution of Type III secretion system - basic and applied research -

III型分泌系统的体外重建-基础与应用研究-

• 批准号: 23790468
• 负责人: HAYASHI Fumio
• 金额: $ 2.25万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23790468/
• 关键词: 病原性; 3型分泌システム; タンパク質大量発現; 再構成; エフェクター; シャペロン; 3型分泌装置; 3型分泌; サルモネラ

SptP is a virulence effector protein of Salmonella that is involved in bacterial invasion into a host cell. For effective secretion, SptP forms a complex with SptP-specific chaperone SicP through its chaperone-binding domain, residues 35-139. We suggested that residues 106-136 of SptP are important for complex formation with SicP by in vitro reconstitution experiments. The dissociation of the SptP/SicP complex requires ATPase activity of InvC. So, we purified InvC, and then characterized its ATPase activity and tested whether InvC ATPase dissociates the complex. InvC ATPase activity showed positive cooperativity, suggesting that InvC subunits form a homo-oligomer. Furthermore the ATPase activity was stimulated in the presence of liposomes, suggesting that InvC interacts with plasma membrane and the activity is regulated by the interaction. In the presence of liposomes and SptP/SicP complexes, InvC ATPase activity was not increased further and did not dissociate SptP/SicP complexes.

SptP是沙门氏菌的毒力效应蛋白，参与细菌侵入宿主细胞。为了有效分泌，SptP通过其伴侣结合结构域（残基35-139）与SptP特异性伴侣SicP形成复合物。通过体外重构实验，我们发现SptP残基106-136对于与SicP形成复合物很重要。SptP/SicP复合物的解离需要InvC的atp酶活性。因此，我们纯化了InvC，并对其atp酶活性进行了表征，并测试了InvC atp酶是否能解离复合物。InvC atp酶活性表现出正协同性，表明InvC亚基形成同质寡聚物。此外，脂质体的存在刺激了atp酶的活性，表明InvC与质膜相互作用，并通过相互作用调节其活性。在脂质体和SptP/SicP复合物存在的情况下，InvC atp酶活性没有进一步升高，也不会解离SptP/SicP复合物。

项目成果

Interactions of SicP with SptP subdomains in SicP-binding domain

SicP 与 SicP 结合域中的 SptP 子域的相互作用

• 发表时间: 2012
• 作者: Kawashima;Y.;Hayashi;F. Kenji Oosawa
• 通讯作者: F. Kenji Oosawa

SptP106–136 plays a role in the complex formation with SptP-specific chaperone SicP

SptP106–136 在与 SptP 特异性伴侣 SicP 的复合物形成中发挥作用

• DOI: 10.1080/09168451.2014.921552
• 发表时间: 2014
• 期刊: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
• 作者: F. Hayashi;Yuri Kawashima;Shinobu Takeuchi;Kensuke Okimori;Eri Inobe;K. Oosawa
• 通讯作者: K. Oosawa

SptPの106-136残基がSicPとの複合体形成に重要である

SptP 的残基 106-136 对于与 SicP 形成复合物非常重要

• 发表时间: 2014
• 作者: Hayashi;F.;Kawashima;Y.;Takeuchi;S.;Okimori;L.;Inobe;E.;and Oosawa;K.;林史夫,川島有理恵,竹内仁,沖森健輔,大澤研二
• 通讯作者: 林史夫,川島有理恵,竹内仁,沖森健輔,大澤研二

サルモネラ病原性タンパク質/シャペロン複合体の試験管内形成

沙门氏菌毒力蛋白/伴侣复合物的体外形成

• 发表时间: 2011
• 作者: Shin-Ichi Inoue;Mamoru Niikura;Natsuki Yokota;Yasushi Kawakami;Akihiko Uchida;Fumie Kobayashi;芦田 浩;井口 純,伊豫田 淳,勢戸 和子,大西 真;徳永順士;川島有里恵,伊野部江里,林史夫,大澤研二
• 通讯作者: 川島有里恵,伊野部江里,林史夫,大澤研二

サルモネラ3型分泌システムのタンパク質科学

沙门氏菌 3 型分泌系统的蛋白质科学

• 发表时间: 2012
• 作者: 井上信一;新倉 保;峯尾松一郎,小林富美惠;林史夫
• 通讯作者: 林史夫