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壁細胞特異的Ｎｏｔｃｈ３による虚血性血管新生メカニズムの解明

通过壁细胞特异性Notch3阐明缺血性血管生成机制

基本信息

批准号：
12J07954
负责人：
山本由美
金额：
$ 2.32万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute (2013-2014)Yamaguchi University (2012)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J07954/
关键词：
CADASIL 血管性認知症脳小血管病血管新生 Notch3

项目摘要

平成２５年度の結果を踏まえ、平成２６年度には、変異Notch3トランスジェニックマウスの大動脈、髄膜血管、腎血管などの血管でもF/Gアクチン比を測定した。すると、大動脈よりも細動脈などの小血管で野生型と変異型に有意差がみられることがわかった。これは、CADASILが脳小血管病であることと整合性がある。そこで、マウスの脳から血管平滑筋初代培養細胞（CVSMC）を採取し、Notch3変異が血管平滑筋機能におよぼす影響を調べた。CVSMCを正常酸素圧および低酸素圧下で培養したところ、野生型と比べて変異型ではHIF1αの増加が優位に低下していた。また、この低酸素培養によりG-, F-actin比やα-Tubulinなどの細胞骨格タンパク量も変化することがわかり、以前western blottingの結果解析でα-Tubulinを補正に使用していたのは間違いであったことがわかった。そこで、今回の結果と前回の結果を再解析したところ、CVSMCでもiPS細胞由来平滑筋細胞でも、変異型の方が虚血侵襲によるHIF1αの増加が少なかった。つまり、CADASILの血管平滑筋は虚血に関する反応性が悪い可能性が示唆された。これは、iPS細胞由来平滑筋細胞を低酸素で３日間培養した時にCADASILで細胞死が優位に増加していたこととも整合性がある。ところが、Cultrex Directed In Vivo Angiogenesis AssayによりVEGFによる血管新生能を評価すると、野生型よりもむしろ変異型でより血管新生が亢進しているという結果が得られた。変異型マウスの脳梗塞モデルでより脳梗塞が悪化するという従来のデータとは相反する結果である。ただし、新生血管の構成細胞を詳しく調べたところ、変異マウスの新生血管ではPDGFRβの量が少ない、つまり壁細胞が少ない可能性が示唆されている。

The F/G ratio of arteries, pericardial vessels and renal vessels was measured. The blood vessels in the aorta are wild type and heterotypic. CADASIL Small vessel disease The effect of Notch3 on vascular smooth muscle function was investigated. CVSMC was cultured under normal and low pH conditions, and HIF-1α was elevated under normal and low pH conditions. The results of western blotting analysis of α-Tubulin in vitro were corrected by using G-, F-actin ratio and α-Tubulin in vitro. Therefore, the results of this session and the results of the previous session are re-analyzed. CVSMC iPS cells are derived from smooth muscle cells, and the increase in HIF1 α is less due to the invasion of blood deficiency due to abnormal patterns. CADASIL's vascular smooth muscle is related to blood deficiency, and the possibility of anti-inflammatory is indicated. iPS cells are derived from smooth muscle cells and are low in acid content. CADASIL cells are cultured during the day. Cultrex Directed In Vivo Angiogenesis Assay Results for VEGF and Angiogenesis Hyperactivity in Wild Type The result of this is that The number of PDGFRβ in neovascular cells is less than that in parietal cells, and the possibility of PDGFRβ in neovascular cells is less than that in parietal cells.