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Screening of factors affecting gene targeting efficiency.

筛选影响基因打靶效率的因素。

基本信息

批准号：
24780010
负责人：
ENDO Masaki
金额：
$ 3万
依托单位：
National Institute of Agrobiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Arabidopsis tester lines possessing an I-SceI recognition site and an inducible I-SceI expression system were established for monitoring protein attachment at DNA double strand break (DSB) site and for monitoring gene targeting events. By using this experimental material, it was revealed that gene targeting efficiency was increased by a factor of 5-10 by DSB induction during transformation of gene targeting vector.It is known that T-DNAs preferentially integrate at DNA DSB sites. Previous studies show that VirD2, which is one of the key Agrobacterium tumefaciens proteins involved in T-DNA processing and transfer is important for efficient T-DNA integration in to the plant genome. However there is no direct evidence to show the role of VirD2 in T-DNA integration step. For detecting in vivo VirD2 attachment at DSB sites, I established chromatin immunoprecipitation assay using protoplast of this Arabidopsis tester line with transfection of VirD2 expression cassette and DSB induction.

建立了具有I-SceI识别位点和诱导型I-SceI表达系统的拟南芥测试系，用于监测DNA双链断裂（DSB）位点处的蛋白质附着和监测基因打靶事件。通过使用该实验材料，揭示了在基因打靶载体的转化过程中，通过DSB诱导，基因打靶效率提高了5-10倍。VirD 2是根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）中参与T-DNA加工和转移的关键蛋白之一，对T-DNA整合到植物基因组中具有重要作用。然而，没有直接证据表明VirD 2在T-DNA整合步骤中的作用。为了检测体内VirD 2在DSB位点的附着，我建立了染色质免疫沉淀法，使用该拟南芥测试系的原生质体转染VirD 2表达盒和DSB诱导。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

DNA double strand breaks and targeted T-DNA integration in Arabidopsis

拟南芥中 DNA 双链断裂和靶向 T-DNA 整合

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Endo M;Gelvin S;Toki S.
通讯作者：
Toki S.

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DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
遠藤真咲;Stanton B Gelvin,土岐精一
通讯作者：
Stanton B Gelvin,土岐精一

植物ゲノムの標的遺伝子改変における人工制限酵素の利用

利用人工限制性内切酶对植物基因组进行靶向遗传修饰

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
生物工学会誌
影响因子：
0
作者：
遠藤真咲;土岐精一
通讯作者：
土岐精一

植物におけるゲノム編集

植物基因组编辑

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
遺伝
影响因子：
0
作者：
遠藤真咲;土岐精一
通讯作者：
土岐精一

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DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
遠藤真咲;三上雅史;土岐精一
通讯作者：
土岐精一

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