ウイルスベクターを用いた標的細胞選択的ジーンターゲッティング法の開発

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本研究計画では、独自に開発した逆行性感染型レンチウイルスベクター(狂犬病ウイルスエンベロープ蛋白質を利用した改変レンチウイルスベクター;RV-G/HIV-1ベクター)にCreリコンビナーゼ遺伝子を組み込んだ発現誘導ベクターと、順行性感染型ベクターとしてアデノ随伴ウイルスベクター(AAVベクター)にloxPコンポーネントを組み込んだ発現制御ベクター(目的配列の直前にloxP配列でストップカセットを挟んだ配列を挿入したもの)の多重感染による部位特異的組換え反応を応用して、特定の神経路を構成する神経細胞でのみ外来遺伝子の発現が起こるような遺伝子操作手法をサル(ニホンザルを中心としたマカクザル)で確立する。平成20年度は、サル脳への遺伝子導入に適したRV-G/HIV-1ベクターとAAVベクター(特にAAV-1ベクター)の検討を行ってきた。その結果、精製・濃縮法の改良によって、有効なウイルスベクターが得られつつある。現在、改良を加えたRV-G/HIV-1ベクターとAAVベクター(AAV-1およびAAV-2ベクター)について、サル脳への遺伝子導入実験を進めている。GFP等のマーカー遺伝子を用いて、これらのウイルスベクターによる神経路選択的遺伝子発現制御法の有効性に関する検証実験を行う。具体的には、線条体にRV-G/HIV-1ベクターを、線条体に入力する大脳皮質や視床、黒質にAAVベクターを注入し、線条体投射細胞でのみGFP遺伝子が発現することを確認する。