ウイルスベクターを用いた標的細胞選択的ジーンターゲッティング法の開発

使用病毒载体开发靶细胞选择性基因打靶方法

• 批准号: 19650082
• 负责人: 高田 昌彦
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19650082/
• 关键词: ウイルスベクター; 遺伝子改変; Cre-loxP; 大脳基底核; 大脳皮質; 視床; 黒質; サル; 運動領野; 前頭前野; 運動制御; 行動発現; ジストニア; 変異マウス

本研究計画では、独自に開発した逆行性感染型レンチウイルスベクター(狂犬病ウイルスエンベロープ蛋白質を利用した改変レンチウイルスベクター;RV-G/HIV-1ベクター)にCreリコンビナーゼ遺伝子を組み込んだ発現誘導ベクターと、順行性感染型ベクターとしてアデノ随伴ウイルスベクター(AAVベクター)にloxPコンポーネントを組み込んだ発現制御ベクター(目的配列の直前にloxP配列でストップカセットを挟んだ配列を挿入したもの)の多重感染による部位特異的組換え反応を応用して、特定の神経路を構成する神経細胞でのみ外来遺伝子の発現が起こるような遺伝子操作手法をサル(ニホンザルを中心としたマカクザル)で確立する。平成20年度は、サル脳への遺伝子導入に適したRV-G/HIV-1ベクターとAAVベクター(特にAAV-1ベクター)の検討を行ってきた。その結果、精製・濃縮法の改良によって、有効なウイルスベクターが得られつつある。現在、改良を加えたRV-G/HIV-1ベクターとAAVベクター(AAV-1およびAAV-2ベクター)について、サル脳への遺伝子導入実験を進めている。GFP等のマーカー遺伝子を用いて、これらのウイルスベクターによる神経路選択的遺伝子発現制御法の有効性に関する検証実験を行う。具体的には、線条体にRV-G/HIV-1ベクターを、線条体に入力する大脳皮質や視床、黒質にAAVベクターを注入し、線条体投射細胞でのみGFP遺伝子が発現することを確認する。

This research project で は, alone に 発 し た retrograde infection type レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー (rabies ウ イ ル ス エ ン ベ ロ ー プ protein を using し た change - レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー; RV - G/HIV - 1 ベ ク タ ー) に Cre リ コ ン ビ ナ ー ゼ posthumous son 伝 を group み 込 ん だ 発 now induced ベ ク タ ー と type, infection of anterograde ベ ク タ ー と し て ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス ベ ク タ ー (AAV ベ ク タ ー) に loxP コ ン ポ ー ネ ン ト を group み 込 ん だ 発 now suppression ベ ク タ ー (purpose with column の way に loxP match Column で ス ト ッ プ カ セ ッ ト を carry ん だ match column を scions into し た も の) with multiple infections の に よ る site specific group change え anti 応 を 応 with し て, specific の 経 god road を す る god 経 cells で の み foreign heritage 伝 son の 発 が up now こ る よ う な heritage 伝 child practices を サ ル (ニ ホ ン ザ ル を center と し た マ カ ク ザ ル) で establish す る. 20 year は pp.47-53, サ ル 脳 へ の posthumous son 伝 import に optimum し た RV - G/HIV - 1 ベ ク タ ー と AAV ベ ク タ ー (especially に AAV - 1 ベ ク タ ー) の 検 line for を っ て き た. The そ そ result, the refining and concentrating method <s:1> was improved によって, and it was effective なウ <s:1> スベ スベ タ タ が が が られ ある ある ある. Now, improved を え た RV - G/HIV - 1 ベ ク タ ー と AAV ベ ク タ ー (AAV - 1 お よ び AAV - 2 ベ ク タ ー) に つ い て, サ ル 脳 へ の heritage 伝 son import be 験 を into め て い る. Traces of GFP etc. の マ ー カ ー 伝 son を with い て, こ れ ら の ウ イ ル ス ベ ク タ ー に よ る god 経 road sentaku heritage 伝 son 発 の have sharper sex suppression method now に masato す る 検 card be 験 う を line. Specific に は, line body に RV - G/HIV - 1 ベ ク タ ー を, line body に す into force る big 脳 cortex や bed, black mass に AAV ベ ク タ ー を injection し project, line body cells で の み GFP heritage 伝 son が 発 now す る こ と を confirm す る.

项目成果

マカクザルにおける頭頂葉から前頭前皮質への多シナプス性入力様式.

猕猴从顶叶到前额皮质的多突触输入模式。

• 发表时间: 2007
• 作者: 平田 快洋;宮地 重弘;井上 謙一;今西 美知子;高田 昌彦
• 通讯作者: 高田 昌彦

時間認知におけるサル前頭前野の役割.

猴子前额叶皮层在时间感知中的作用。

• 发表时间: 2007
• 作者: 湯本 直杉;陸 焼峰;宮地 重弘;南部 篤;深井 朋樹;高田 昌彦
• 通讯作者: 高田 昌彦

東京都神経科学総合研究所

东京都神经科学研究所

Efficient gene transfer via retrograde transport in rodent and primatebrains by an HIV-1-based vector pseudotyped with rabies virusglycoprotein.

通过用狂犬病病毒糖蛋白假型化的基于 HIV-1 的载体在啮齿动物和灵长类动物脑中通过逆行运输进行有效的基因转移。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Hum Gene Ther 18
• 作者: Kato S;Inoue K;Kobayashi K;Yasoshima Y;Miyachi S;Inoue S;Hanawa H;Shimada T;Takada M;Kobayashi K
• 通讯作者: Kobayashi K

Neuronal specificity of α-synuclein toxicity and effect of parkinco-expression in primates.

灵长类动物中 α-突触核蛋白毒性的神经元特异性和 Parkinco 表达的影响。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Neuroscience 144
• 作者: Yasuda T;Miyachi S;Kitagawa R;Wada K;Nihira T;Ren Y-R;Hirai Y;Ageyama N;Terao K;Shimada T;Takada M;Mizuno Y;Mochizuki H
• 通讯作者: Mochizuki H