ＨＩＶ－１潜伏感染を標的としたＡＩＤＳ治療薬開発のための基礎研究

针对潜在 HIV-1 感染开发艾滋病疗法的基础研究

基本信息

批准号：
14J01801
负责人：
工藤恵理子
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J01801/
关键词：
HIV-1 潜伏感染 COMMD1 NF-κB Sp1 転写制御プロモーター IκB-α 宿主因子自然免疫ＴＬＲ

项目摘要

COMMD1はHIV-1感染や腫瘍細胞の生存、慢性炎症など様々な疾患に関与している。また、これまでの研究によりHIV-1潜伏感染細胞においてCOMMD1はHIV-1潜伏感染の維持を増強する因子であると見出した。COMMD1の発現制御機構の解明は、タンパク質レベルにおける発現制御の解明が行われている一方で、転写制御における検討は全く行われていない。本研究では、COMMD1の発現制御を検討するために、COMMD1プロモーターコンストラクトの作製を行った。U937細胞からDNAを回収し、-1k, -0.5k, -0.25k, -0.05kのCOMMD1プロモーター領域をPCR法により増幅し、pGL4ベクターにクローニングした。得られたコンストラクトを用いてルシフェラーゼアッセイを行った。その結果、-0.5kコンストラクトで最も高い活性を示した。また、他のコンストラクトにおいても活性があることが示された。さらに、Sp1過剰発現においてプロモーター活性およびmRNA発現の増加が確認された。一方で、Sp1の阻害剤であるmithramycin A処理においてプロモーター活性およびmRNA発現が抑制された。COMMD1プロモーター領域へのSp１の結合が確認された。以上より、Sp1はCOMMD1の転写を制御していることが明らかになり、HIV-1潜伏感染細胞における発現誘導を担っている因子の１つである可能性が示唆された。

COMMD1参与了多种疾病，包括HIV-1感染，肿瘤细胞存活和慢性炎症。先前的研究还发现，COMMD1是增强HIV-1潜在感染细胞中HIV-1潜在感染的因素。虽然COMMD1的表达控制机理已在蛋白质水平上阐明，但未对转录控制进行研究。在这项研究中，我们创建了一个COMMD1启动子构建体，以研究COMMD1表达的调节。从U937细胞，-1K，-0.5K，-0.25K，-0.05K Commd1启动子区域收集DNA，通过PCR扩增并将其克隆到PGL4载体中。所得构建体用于执行荧光素酶测定。结果，-0.5K构建体显示最高的活性。它也被证明在其他构造中具有活性。此外，在SP1过表达中证实了启动子活性和mRNA表达的增加。另一方面，在用SP1的抑制剂MITHRAMYCIN A治疗过程中，启动子活性和mRNA表达被抑制。 SP1与COMMD1启动子区域的结合得到了证实。从上面可以揭示出SP1调节TMD1转录，这表明它可能是负责诱导潜在感染细胞表达的因素之一。