分節時計遺伝子Ｈｅｓ７の発現振動における細胞間同期化機構の解明

体節形成遺伝子Hes7の未分節中胚葉(PSM)における2時間周期の発現振動(オシレーション)を可視化し、一細胞レベルでのオシレーション位相の定量を行うため、Hes7蛍光レポータートランスジェニックマウスを作製、細胞の3Dトラッキングを行い、ヒルベルト変換により位相を推定、可視化に成功した。このレポーターマウスを用いて、Notchシグナルによる細胞間相互作用の有無により、Hes7振動子の動態、シンクロ率がどのように変化するかについてリアルタイム定量データを用いて解析を行った。加えて、より内在性の発現動態を観察できるよう、改良版として融合タンパク質型のものも樹立した。このレポーターは、Hes7-UbLuc発光レポーター(Takashima et al. 2011 PNAS)と同様の周期で振動する。このレポーターを用いることで、頭尾軸に沿った位置関係と併せて各細胞の周期、周囲の細胞からの位相ずれなどについて定量できる。またこのレポーターは、PSM細胞の分散培養系との組み合わせも可能であることを確認した。

体節形成遺伝子Hes7の未分節中胚葉(PSM)における2時間周期の発現振動(オシレーション)を可視化し、一細胞レベルでのオシレーション位相の定量を行うため、Hes7蛍光レポータートランスジェニックマウスを作製、細胞の3Dトラッキングを行い、ヒルベルト変換により位相を推定、可視化に成功した。このレポーターマウスを用いて、Notchシグナルによる細胞間相互作用の有無により、Hes7振動子の動態、シンクロ率がどのように変化するかについてリアルタイム定量データを用いて解析を行った。加えて、より内在性の発現動態を観察できるよう、改良版として融合タンパク質型のものも樹立した。このレポーターは、Hes7-UbLuc発光レポーター(Takashima et al. 2011 PNAS)と同様の周期で振動する。このレポーターを用いることで、頭尾軸に沿った位置関係と併せて各細胞の周期、周囲の細胞からの位相ずれなどについて定量できる。またこのレポーターは、PSM細胞の分散培養系との組み合わせも可能であることを確認した。