Transfektion von Eimeria nieschulzi Sporozoiten mit Reportergen und Selektionsmarkern und anschließende Kultivierung in vitro

用报告基因和选择标记转染Meileia nieschulzi子孢子并随后进行体外培养

• 批准号: 5429887
• 负责人: Professor Dr. Rudolf Entzeroth
• 金额: --
• 依托单位: Professur für Spezielle Zoologie und Parasitologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5429887?language=en
• 关键词: Transfektion; von; Eimeria; nieschulzi; Sporozoiten

Plasmid-Konstrukte mit Sequenzen von Eimeria tenella (Etactin5`, Etmic5`) einem spezifischen Parasiten des Haushuhns, sollen in Bakterien hergestellt und anschließend in Sporozoiten von Eimeria nieschulzi, einem Parasiten der Ratte transfiziert werden. Zur gezielten Selektion transfizierter Sporozoiten ist weiterhin eine Sequenz des DHFR-Gens einkloniert, das Resistenz gegen Pyrimethamin verleiht. Die transfizierten Sporozoiten sollen anschließend in Zellkultur zur Entwicklung gebracht werden und mit Hilfe der Fluoreszenzmarker GFP bzw. YFP die zunächst transienten Transformanten nachgewiesen werden. Erstes Teilziel ist, die Expression von Mikronemenprotein und Actin in lebenden Sporozoiten und Meronten der 1. und 2. Generation zu verfolgen. In einem zweiten Schritt sollen dann stabil transfizierte Sporozoiten, die Gene für ein Mikronemen und/oder Actin-Protein sowie ein weiteres Apicoplastenprotein (acyl carrier protein, acp) enthalten, hergestellt werden. Die Gensequenzen sollen gleichfalls mit den Reportergenen für GFP/YFP gekoppelt, ins Genom der Parasiten integriert werden. In Zellkulturen lassen sich transfizierte Merozoiten bis zu 2. Meronten-Generation heranzüchten, die dann allerdings über einen Tierversuch auf den natürlichen Wirt, die Ratte, übertragen werden müssen. Über die Reporterproteine läßt sich die Expression der verschiedenen Gene während der Entwicklungsstadien (Merogonie in Zellkultur und Gamogonie im Wirtstier Ratte) nachweisen und mikroskopisch dokumentieren. Als langfristiges Ziel ist nach erfolgreichem Abschluß der Teilziele die Herstellung von knock-out Mutanten für ein weiteres Gen, das für Hüllbildungskörper in Gamonten kodiert, vorgesehen.

用Eimeria tenella（Etactin 5 `，Etmic 5`）的测序质粒构建了一种特异性的Haushuhns寄生虫，在Eimeria nieschulzi的孢子虫中分离和定位，即一种韦尔登的寄生虫。选择合适的转殖子还需要一个DHFR基因的测序，因为抗性基因是吡蚜胺。转殖子孢子可在发育韦尔登和利用转殖子标记GFP bzw的细胞培养物中稳定存在。YFP在韦尔登之后就开始了短暂的转变。第一位技术人员，在活孢子和裂殖子中表达微小蛋白和肌动蛋白1。和2.一代人的生活。在一个稳定的转座子中，一个线粒体和/或肌动蛋白的基因可以使一个脂蛋白（酰基载体蛋白，acp）降解，从而韦尔登。通过GFP/YFP基因组的报告，Gensequenzen sollen gleichfalls，ins Genom der Parasiten integriert韦尔登。在Zellkulturen lassen sich transfizierte Merozoiten bis zu 2.梅龙特-代人，这一次，他们把一个等级的人推到了自然的维尔特身上，他们的老鼠，韦尔登，都被吃掉了。报告蛋白质的表达是由发育中的基因表达（Zellkultur中的染色体畸变和Wirtstier Ratte中的染色体畸变）决定的。所有的语言Ziel都是为了消除Teilziele对一个被淘汰的基因突变体的依赖，这是为了在Gamonten kodiert，vorgesehen的Hüllbildungskörper。