ｉＰＳ細胞由来Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞を用いた消化器がんの新規治療開発

利用 iPS 细胞衍生的 Vγ9Vδ2 T 细胞开发胃肠癌新疗法

• 批准号: 15J00925
• 负责人: 渡邉 大輔
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J00925/
• 关键词: 免疫療法; 人工多能性幹細胞; γδT細胞; iPS細胞; がん免疫療法

本研究の目的は、iPS細胞由来γ9δ2T細胞を用いた消化器がんに対する新規治療法を開発することである。iPS細胞からγ9δ2T細胞を作製することができれば、従来のγ9δ2T細胞を用いた免疫療法の欠点である、細胞数確保の困難性と細胞の疲弊(exhaustion)といった問題が解決される。当初の研究実施計画では、当該年度は、1. ヒトγ9δ2T細胞からのiPS細胞樹立(樹立条件の最適化)、2. 誘導したγ9δ2T細胞由来iPS細胞を用いたγ9δ2T細胞への誘導、3. 誘導したγ9δ2T細胞由来iPS細胞を用いたγ9δ2T細胞への誘導について、研究実施することを予定していた。1. については、具体的には、末梢血からγ9δ2T細胞を増幅培養し、増幅培養したγ9δ2T細胞を用いて、iPS細胞を樹立した。本実験は、計4回施行し、全4回で、作製したiPS細胞の複数株において、Vγ9 Vδ2-TCR領域の遺伝子再構成が確認できた。Vγ9 Vδ2-TCR領域の遺伝子再構成の有無は、ゲノムPCR・フラグメント解析で評価した。さらにシークエンス解析により、相補性決定領域(CDR)3領域の配列を決定した。また、未分化マーカーの発現を、免疫染色法・RT-PCR法・リアルタイムPCR法で評価し、センダイウイルスベクターの遺残を、免疫染色法・RT-PCR法・リアルタイムPCR法で評価し、三胚葉系への分化能の有無を、胚様体形成法で評価した。2. について、具体的には、過去の既報を参考に、OP9細胞上に、樹立したγ9δ2T細胞由来iPS細胞から作製した胚葉体を播種することで、分化誘導を試みた。フローサイトメトリー解析で、CD34+/CD43+血液前駆細胞を確認することが出来たが、本研究では、成熟T細胞は誘導できなかった。3. については、計画2. を完遂できなかったため、評価できなかった。

The aim of this study is to develop new therapeutic methods for iPS cells derived from γ9δ2T cells in the digestive tract. iPS cell γ9δ2T cell production and control, and the future γ9δ2T cell use in immunotherapy deficiencies, cell number to ensure the difficulty of cell exhaustion problems were solved. The original research implementation plan is reversed, and the current year is reversed, 1.γ9δ2T cell culture (optimization of culture conditions), 2. Induction of γ9δ2T cells from iPS cells, induction of γ9δ2T cells from iPS cells, 3.γ 9 δ2T cells are induced from iPS cells, and the induction of γ9δ2T cells is studied. 1. In particular, γ9 δ2T cells from peripheral blood were cultured at elevated amplitude, γ 9 δ 2 T cells were cultured at elevated amplitude, and iPS cells were established. This article is about the confirmation of the recombination of multiple strains of iPS cells in the Vγ9 Vδ2-TCR domain. Vγ9 Vδ2-TCR domain gene reconstruction with or without reverse, PCR, DNA analysis and evaluation 3. Complementarity Determination Domain (CDR)3. The development of undifferentiated cells, immunostaining, RT-PCR, differential PCR, immunostaining, RT-PCR, differential PCR, embryogenesis and embryogenesis were evaluated. 2. In addition, the differentiation induction of γ9δ2T cells from iPS cells was also studied. CD34 +/CD43 + blood precursor cells were identified and mature T cells were induced. 3.については、计画2. After the end of the game, the game will be played, and the game will be played.

项目成果

DEVELOPMENT OF IPSC-BASED γδT-CELL IMMUNOTHERAPY FOR DIGESTIVE CANCER

基于 IPSC 的 γδT 细胞免疫疗法治疗消化道癌的进展

• 发表时间: 2017
• 作者: Tomoko Matsubara;Brenton Thomas Laing;Khoa Do;Hu Huang;入山宙・寅丸敦志;Ｄａｉｓｕｋｅ Ｗａｔａｎａｂｅ
• 通讯作者: Ｄａｉｓｕｋｅ Ｗａｔａｎａｂｅ

iPS細胞由来Vγ9Vδ2T細胞を用いる新規消化器がん治療法の開発

使用 iPS 细胞衍生的 Vγ9Vδ2 T 细胞开发新的胃肠道癌症治疗方法

• 发表时间: 2016
• 作者: Tomoko Matsubara;Brenton Thomas Laing;Khoa Do;Hu Huang;入山宙・寅丸敦志;Ｄａｉｓｕｋｅ Ｗａｔａｎａｂｅ;三輪学央・入山宙・長井雅史・七山太;渡邉大輔
• 通讯作者: 渡邉大輔