ES細胞の機能強化とその利用による人工多能性幹細胞の調製

ES细胞的功能增强及利用其制备诱导多能干细胞

• 批准号: 21K19905
• 负责人: 川本 卓男
• 金额: $ 4.08万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19905/
• 关键词: ES細胞; 人工多能性幹細胞; 機能強化; 細胞融合; 人工多能性細胞

マウスES細胞の機能を強化するために、体細胞を初期化して人工多能性幹細胞（iPS細胞）樹立するために用いられる初期化4因子（Oct3/4, Sox2, Klf4, L-myc)を、レトロウィルスベクターを用いて、マウスES細胞（129Sv株）に導入した。感染したマウスES細胞の増殖能およびモルフォロジー、未分化マーカー遺伝子（Nanog）の発現状況を、元のES細胞と比較したところ、大きな変化は変化は見られなかった。また、マウスES細胞の機能を強化する方法として、細胞融合に着目して、まず、手始めに、マウスES細胞とマウス胎児線維芽細胞(MEF細胞）の細胞融合を試みてみた。交流（周波数：1 MHz、電圧：30 V）を20秒間流し、直流パルス（電圧：350 V、パルス間隔：30 μ秒）を3回かけてみたところ、交流によって、パールチェーンは形成できているようだったが、うまく細胞を融合することはできなかった。今後、さらなる条件検討が必要である。併せて、ES細胞の脱核を試みるために、マウスES細胞懸濁液にサイトカラシンBを添加し、Ficollを用いて濃度勾配遠心を試みた。サイトカラシンBの濃度として、1、5、10、25、40 μg/mlを用意し、Ficollの濃度濃度勾配は30、25、20、15、10 %の濃度を用いて作成したが、残念ながら、遠心機器トラブルによって実験を行うことができなくなった。修理に多額の費用が掛かるため、遠心分離による方法は、現在、実施できない状況にある。

マ ウ ス ES cells の を す intensively る た め に, early somatic を し て human pluripotent stem cells (iPS cells) establish す る た め に with い ら れ る early change 4 factors (Oct3/4, Sox2, Klf4, L - myc) を, レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を with い て, マ ウ ス ES cells (sv 129 strains) に import し た. Infection し た マ ウ ス の raised ES cells can yield お よ び モ ル フ ォ ロ ジ ー, undifferentiated マ ー カ ー heritage 伝 child (Nanog) の 発 now を, yuan の ES cells と compare し た と こ ろ, big き な variations change は variations change は see ら れ な か っ た. ま た, マ ウ ス ES cells の を す intensively る method と し て に with mesh, cell fusion し て, ま ず, hand starting め に, マ ウ ス ES cells と マ ウ ス tire line where d bud cells (MEF) の cell fusion を try み て み た. Communication (cycle count: 1 MHz, electricity 圧 : 30 V) between flow し を 20 seconds, dc パ ル ス (electric 圧 : 350 V, パ ル ス interval: 30 mu seconds) を 3 back か け て み た と こ ろ, ac に よ っ て, パ ー ル チ ェ ー ン は form で き て い る よ う だ っ た が, う ま を く cell fusion す る こ と は で き な か っ た. In the future, さらなる conditions 検 discuss が necessary である. And せ て, ES cells の try to take off the nuclear を み る た め に, マ ウ ス ES cell suspensions に サ イ ト カ ラ シ ン を add し B, Ficoll を with い て concentration hook with telecentric を try み た. サ イ ト カ ラ シ ン の B concentration と し て, 1, 5, 10, 25, 40 mu g/ml を intention し, Ficoll の concentration concentration hook は 30, 25, 20, 15, 10% concentration of の を い て made し た が, residual な が ら, telecentric machine ト ラ ブ ル に よ っ て be 験 を line う こ と が で き な く な っ た. Repair に multiple repair costs が hanging るため るため, telephoto separation による method <e:1>, current, actual で な な にある condition にある.