幹細胞マーカーＥｐＣＡＭを用いた肝発癌モデルの樹立とゲノム／エピゲノム異常の解析

利用干细胞标记EpCAM建立肝癌模型并分析基因组/表观基因组异常

• 批准号: 15J01616
• 负责人: 竹田 治彦
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J01616/
• 关键词: 肝癌; ゲノム異常; 幹細胞; EpCAM; AID; 肝細胞癌; 癌幹細胞; 発癌メカニズム

肝癌は臨床的に極めて難治癌であるが、極めて難治たらしめている原因として癌幹細胞の存在が提唱されている。その癌幹細胞からの肝発癌メカニズムを明らかにするというコンセプトで研究を開始した。具体的には、肝臓の幹細胞/前駆細胞や消化管上皮に存在するEpCAM陽性細胞にヒトの遺伝子編集酵素であるAIDを特異的に発現させることにより、消化器組織の幹細胞に遺伝子異常が生じることが肝癌を初めとする消化器癌の発癌につながるか否かを明らかにすることを目的として、研究を進めてきた。まず、初年度に、AIDにタモキシフェン受容体であるERT2を結合したAID-ERT2コンストラクトを作成した。同コンストラクトをEpCAMプロモータ―の下流にknock inすることで、EpCAM発現細胞に特異的にAID-ERT2融合蛋白を発現するEpCAM-AID-ERT2マウスを作成した。2年目は交配を続けて経過観察を行い、解析対象の個体数を確保することに努めた。発癌までに72-90週を見込んでおり、3年目は、EpCAM-AID-ERT2マウスと野生型マウスでの表現型の違いを解析することを目標とした。90週に到達したマウスにつき、順次解剖を行ったところ、EpCAM-AID-ERT2マウス、野生型ともに、肝癌の発生は一例も確認することができなかった。薬剤性肝障害モデルの既報を参考に、薬剤による発癌促進を試みており、経過観察を進めている。一方で、ゲノム解析にむけて、肝癌関連遺伝子の遺伝子解析用パネルを作成し、ヒト腫瘍組織を用いて、癌関連遺伝子のターゲットシーケンスを行うとともに、全エクソンシーケンスを施行し、それぞれ変異検出のための解析プラットフォームを確立した。今後発癌モデルマウスで、上記の解析プラットフォームを応用して変異解析を行っていくことが可能と考えられる。

肝癌在临床上是一种极其难治性的癌症，但已提出癌症干细胞的存在是极其难治性的原因。该研究始于阐明癌症干细胞肝癌发生机制的概念。具体而言，已经进行了研究，目的是阐明消化组织中干细胞中干细胞中的基因异常是否导致消化癌癌，包括肝脏干细胞/祖细胞/祖细胞和消化道上皮细胞中的EPCAM阳性细胞，通过特异性表达人类基因基因基因酶帮助。首先，在第一年，我们创建了一个AID-ERT2结构，该结构将他莫昔芬受体ERT2结合起来以帮助。通过敲击EPCAM启动子的下游构建体，产生了表达AID-ERT2融合蛋白的EPCAM-AID-ERT2小鼠，特别表达了表达EpCAM的细胞中的AID-ERT2融合蛋白。在第二年，我们继续交配并进行跟进，并努力确保对人数进行分析。靶标在癌变前72-90周，在第三年，目标是分析EPCAM-AID-ERT2和野生型小鼠之间的表型差异。当将90周达到90周的小鼠接一个地解剖时，在EPCAM-AID-ERT2小鼠和野生型中均未确认肝癌病例。根据先前关于药物诱导的肝损伤模型的报道，我们正在尝试用药物促进癌症，并正在进行随访观察。另一方面，为了基因组分析，创建了用于肝癌相关基因的遗传分析的小组，并使用人肿瘤组织进行了与癌症相关基因的靶向序列，并进行了所有外显子序列，并为每个突变检测建立了一个分析平台。据认为，使用上述分析平台在癌变模型小鼠的未来将有可能突变分析。