幹細胞マーカーＥｐＣＡＭを用いた肝発癌モデルの樹立とゲノム／エピゲノム異常の解析

利用干细胞标记EpCAM建立肝癌模型并分析基因组/表观基因组异常

• 批准号: 15J01616
• 负责人: 竹田 治彦
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J01616/
• 关键词: 肝癌; ゲノム異常; 幹細胞; EpCAM; AID; 肝細胞癌; 癌幹細胞; 発癌メカニズム

肝癌は臨床的に極めて難治癌であるが、極めて難治たらしめている原因として癌幹細胞の存在が提唱されている。その癌幹細胞からの肝発癌メカニズムを明らかにするというコンセプトで研究を開始した。具体的には、肝臓の幹細胞/前駆細胞や消化管上皮に存在するEpCAM陽性細胞にヒトの遺伝子編集酵素であるAIDを特異的に発現させることにより、消化器組織の幹細胞に遺伝子異常が生じることが肝癌を初めとする消化器癌の発癌につながるか否かを明らかにすることを目的として、研究を進めてきた。まず、初年度に、AIDにタモキシフェン受容体であるERT2を結合したAID-ERT2コンストラクトを作成した。同コンストラクトをEpCAMプロモータ―の下流にknock inすることで、EpCAM発現細胞に特異的にAID-ERT2融合蛋白を発現するEpCAM-AID-ERT2マウスを作成した。2年目は交配を続けて経過観察を行い、解析対象の個体数を確保することに努めた。発癌までに72-90週を見込んでおり、3年目は、EpCAM-AID-ERT2マウスと野生型マウスでの表現型の違いを解析することを目標とした。90週に到達したマウスにつき、順次解剖を行ったところ、EpCAM-AID-ERT2マウス、野生型ともに、肝癌の発生は一例も確認することができなかった。薬剤性肝障害モデルの既報を参考に、薬剤による発癌促進を試みており、経過観察を進めている。一方で、ゲノム解析にむけて、肝癌関連遺伝子の遺伝子解析用パネルを作成し、ヒト腫瘍組織を用いて、癌関連遺伝子のターゲットシーケンスを行うとともに、全エクソンシーケンスを施行し、それぞれ変異検出のための解析プラットフォームを確立した。今後発癌モデルマウスで、上記の解析プラットフォームを応用して変異解析を行っていくことが可能と考えられる。

Liver cancer is clinically difficult to treat and is extremely difficult to treat. Causes of liver cancer include the presence of cancer stem cells. Research on cancer stem cells and hepatocellular carcinoma has begun. Specifically, the presence of liver stem cells/protozoal cells and the epithelium of the digestive tract, the presence of EpCAM-positive cells, the collection of enzymes, and the specific AID, Digestive tissue stem cells are abnormal, liver cancer is the cause of liver cancer, and digestive system cancer is the first cause発 Cancerにつながるか不かを明らかにすることをPurposeとして、Researchを进めてきた.まず, first year に, AID にタモキシフェン receptor ERT2を combined with AID-ERT2 コンストラクトを was made. Same as コンストラクトをEpCAMプロモータ―のdegradable knock In することで, EpCAM cells are specific for AID-ERT2 fusion protein するするEpCAM-AID-ERT2しスを was created. In the 2nd year, the number of individuals and the number of individuals of the elephants are analyzed and ensured.発 Cancer までに72-90 weeks を见込んでおり, 3rd year target, EpCAM-AID-E RT2 マウスとWild type マウスでのphenotypeのviolationいをanalyticsすることをtargetとした. 90 weeks にarrive したマウスにつき、sequential anatomy を行ったところ、EpCAM-AID- A case of ERT2 disease, wild-type disease, and liver cancer has been confirmed.薬剤 liver disorder モデルの日本をReferenceに, 薬剤による発cancer promotion をtrial みており, 経过観看を进めている. One side, ゲノムanalytic analysis, liver cancer-related legacy 伝子の伝子analyses made with パネルを, ヒトtumor tissue を use いて, cancer-related legacy 伝子のターゲットシーケンスを行うとともに、全エクソンシーケンスを行し. From now on, I will be a cancer patient, and the analysis of the above will be done in the future.応用して変different analysisを行っていくことがpossibleとtestえられる.