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ｃ－Ｍｙｂ　ＤＮＡ結合ドメインの機能に着目した生物学的揺らぎの多角的解析

关注c-Myb DNA结合域功能的生物波动的多方面分析

基本信息

批准号：
15J03576
负责人：
稲葉理美
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Kyoto Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03576/
关键词：
熱力学量構造揺らぎ

项目摘要

2016年度は、前年度にNMRや熱測定で得られたc-Myb DNA結合ドメインに関する知見をさらに多角的に評価するべく、1分子解析や高圧下での研究を進めた。1分子解析は、SPring-8の高輝度X線を用いた時分割測定（DXT）を適用し、DNA結合に伴う運動性変化をミリ秒～マイクロ秒で追跡した。測定にあたり、変異体の作製やプローブのラベル部位などの検討も進め、1分子系のアンサンブル量の運動性変化と多分子系での揺らぎの情報がよく相関することを明らかにした。加えて、DNA結合状態での揺らぎの減少が認められ、これはITCやDSCで得られたエントロピー変化量の結果と相関することも明らかとなった。高圧解析では、ダイアモンドアンビルセルを用いて、1 GPaを超える圧力まで測定することで、圧力軸での安定性の差異を明らかにすることに成功した。対象タンパク質の変性圧力中間点は約800 MPaであり、蛍光やNMR測定条件下においてはフォールド構造内の揺らぎを検出可能であることも示した。また、変異体を用いた実験により、タンパク質内部のキャビティと部分モル体積変化（ΔV）との間に良い相関を見出した。これらの結果は、これまでの温度変化やpH変化により得られた揺らぎの情報とも一致する。現在、双方ともに論文執筆中である。さらに、リピート間の構造安定性に着目した研究も進め、c-MybがDNA結合に2つのリピートが必須である裏付けをフォールディングに関わる熱力学量により実証した。

NMR thermal measurement results for 2016 and the previous year were obtained using c-Myb DNA-binding ドメインに关する知见をさらに多角的にreview価するべく, 1-molecule analysis やHigh-pressure under-research を进めた. 1. Molecular analysis, SPring-8 high-intensity X-ray measurement using time-division time division (DXT) is applicable, and DNA binding and mobility changes can be tracked in seconds ~ マイクロ seconds. Measurement of にあたり, 剉variant のやプローブのラベルpart などの検検検も入め, 1-molecule system のアンThe motility change of the サンブルquantity and the polymolecular system での揺らぎのinformation がよくrelated することを明らかにした. Add えて, DNA binding state での揺らぎのdecrease がcognize められ, これはITCやDS Cでgets the result of the quantitative change and the correlation of the results. High pressure analysis method, high pressure analysis method, 1 The measurement of GPa's ultra-high pressure and the stability of the pressure axis have been successful. About 800 is the middle point of the pressure of the 対色タンパクquality Under the conditions of MPa and light NMR measurement, it is possible to show the structure of the structure within the structure.また, 変variant を Use いた験により, タンパク Internal のキャビティと Partial モル volume change (ΔV) との间に好いrelated した. The result of これらのは、これまでのTemperature change やpH change によりget られたらぎのinformation ともagree する. Currently, both parties are in the process of writing the paper.さらに、リピート间のstructural stability にobject research したも enter め、c-Myb がDNA binding に2つのリピートがmust である里pay けをフォールディングに关わるThermodynamic quantity により実证した.