Biophysikalische Charakterisierung des durch NSF und Alpha-SNAP katalysierten Dissoziation von SNARE-Komplexen

NSF 和 alpha-SNAP 催化的 SNARE 复合物解离的生物物理表征

• 批准号: 5439669
• 负责人: Professor Dr. Dirk Fasshauer
• 金额: --
• 依托单位: Département de biologie cellulaire et morphologie (DBCM)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5439669?language=en
• 关键词: Biophysikalische; Charakterisierung; des; durch; NSF

SNARE-Proteine sind an allen intrazellulären Membranfusions-Vorgängen des sekretorischen Pathways beteiligt. Man vermutet, daß sie die Membranfusion katalysieren, wobei sich die in den beteiligten Membranen befindlichen SNAREs reißverschlußartig zusammenlagern und dadurch den Fusionsvorgang einleiten. Es entsteht ein stabiler hetero-oligomerer Komplex (SNARE-Komplex), der nach erfolgter Fusion durch die ATPase NSF und den Kofaktor a-SNAP wieder dissoziiert wird. Während die Assoziation von SNAREs sowie die damit verbundenen Intermediate und Konformationsänderungen bereits gut verstanden sind, ist über den Mechanismus der NSF-vermittelten Dissoziation nur wenig bekannt. Man nimmt an, dass NSF den SNARe-Komplex ringartig umfaßt, wobei a-SNAP als Adaptor fungiert. Nachfolgend wir der SNARE-Komplex durch eine durch ATP-Hydrolyse angetriebene Konformationsänderung in NSF dissoziiert. Im hier vorgestellten Projekt ist geplant, die Interaktion von NSF und a-SNAP mit SNARE-Komplexen im Detail zu untersuchen und die Einzelschritte der Dissoziationsreaktion aufzuklären. Im ersten Teil des Vorhabens soll die Bindung von NSF und a-SNAP an den SNARE-Komplex charakterisiert werden. Ziel ist es, ein genaueres Bild über die zugrundeliegenden Protein-Protein-Interaktionen und den Aufbau des Disassemblyapparates zu erhalten. Anschließend soll die NSF-katalysierte Dissoziation von SNARE-Proteinen untersucht werden. Dabei werden proteinchemische, fluoreszenzspektroskopische und kalorimetische Methoden zum Einsatz kommen. Außerdem sollen durch gezielte Verwendung definierter Mutanten sowie von nicht hydrolysierbaren ATP-Analoga vertiefende Einblicke in den Mechanismus der ATPase NSF erhalten werden.

SNARE-蛋白质是一个艾伦的细胞内膜融合-血管生成途径。人们发现，膜的破坏是非常危险的，因为在发现SNARES之前，膜的破坏是非常危险的，而且膜的破坏是非常危险的。这是一种稳定的异源寡聚体复合物（SNARE复合物），通过ATP酶NSF和Kofaktor α-SNAP进行融合。当SNARE的联合使用使得中间体和信息化变得更加可靠时，NSF的分散机制就变得更加简单了。例如，NSF将SNARe-Komplex插入到适配器中，而SNAP则是一种真菌。随后通过NSF中的ATP-水解作用进行SNARE复合物的溶解。在这个项目中，NSF和a-SNAP与SNARE-Komplexen的相互作用详细说明了这一点，并提出了一个解决方案。在第一个章节中，我们讨论了NSF和a-SNAP的绑定以及SNARE复杂性的韦尔登。这是一张普通的图片，展示了蛋白质-蛋白质-相互作用和分解装置的结构。SNARE-蛋白韦尔登的NSF-催化剂解离。本研究采用韦尔登化学、荧光光谱和比色法进行测定。因此，通过对NSF韦尔登作用机制中不水解ATP类似物的突变进行明确的定义，可以解决这一问题。