血中ホルモン量を用いたサケ科魚類の成長率評価体系の構築

基于血液激素水平的鲑鱼生长率评价体系的构建

基本信息

批准号：
16J03437
负责人：
金子信人
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03437/
关键词：
シロザケ稚魚インスリン様成長因子-I インスリン様成長因子結合蛋白-1b インスリン様成長因子結合蛋白-1a 成長率評価ストレス診断インスリン様成長因子インスリン様成長因子結合蛋白個体成長率成長の指標シロザケギンザケ

项目摘要

本申請は、サケ科魚類の成長率を評価するための複数の生理学的指標を確立し、これらを組み合わせた安定かつ高感度な成長率評価体系の構築することを目的とした。魚類の成長はインスリン様成長因子-I（IGF-I）およびIGF結合蛋白（IGFBP）が重要な役割を果たす。また、サケ科魚類の血中には少なくとも3種類のIGFBP（IGFBP-1a, -1b, -2b）が存在し、IGF-Iの活性をコントロールしている。血中のIGF-IおよびIGFBP-1bはそれぞれ正および負の成長指標としての有用性が期待されている。また、IGFBP-1aと呼ばれるタイプは、強い異化状態下で血中に誘導されると考えられているが、詳細な機能は不明であり、かつ血中量を測定する方法は確立されていない。当該年度は、まず血中IGFBP-1aの時間分解蛍光免疫測定法（TR-FIA）の確立を行った。大腸菌発現系で作製した組換えサクラマスIGFBP-1aを家兎に免疫して抗血清を作製し、また組換え蛋白をビオチンで標識することで、競合法によるTR-FIAの確立を試みた。結果、良好な標準曲線が得られ、かつサクラマスやニジマスといった他のサケ科魚類の血清希釈系列と平行性が認められた。抗体の交差反応性も認められなかったため、定量系が確立できた。一方で、確立した測定系を用いて絶食・再給餌実験に供したサクラマスの血中IGFBP-1a量を測定したところ、生物学的な反応がみられていない。このことは、抗体がIGFBP-1aのフラグメントを認識している可能性を示し、生物活性をもつIGFBP-1aのみを検出する方法が求められる。また、複数の指標を組み合わせた成長率評価体系の構築を進めた。IGF-IとIGFBP-1bを組み合わせたIGF-I/BP-1b比の反応を調べ、これがそれぞれ単独とは異なる「個体の代謝状態」を反映する指標となりえることを示唆した。

该应用程序旨在建立多个生理指标，以评估鲑鱼鱼的生长速率，并创建一个结合这些鲑鱼鱼类的稳定且高度敏感的增长率评估系统。胰岛素样生长因子-I（IGF-I）和IGF结合蛋白（IGFBP）在鱼类生长中起重要作用。此外，鲑鱼鱼的血液中至少存在三种类型的IGFBP（IGFBP -1A，-1B，-2B），从而控制了IGF -I的活性。血液IGF-I和IGFBP-1B有望分别用作正生长指标和负面生长指标。此外，尽管认为在强分解代谢状态下的血液中被认为是在血液中诱导的类型，但其详细功能尚不清楚，并且尚未确定一种测量血容量的方法。在今年，第一个是为血液IGFBP-1A建立时间分辨的免疫荧光测定法（TR-FIA）。抗血清是由在大肠杆菌表达系统中产生的重组樱桃鲑鱼IGFBP-1A产生的，以产生抗血清，并通过将重组蛋白标记为生物素，我们试图通过竞争方法来建立TR-FIA。结果，获得了一条良好的标准曲线，并与其他鲑鱼科（如樱桃鲑鱼和彩虹鳟鱼）的血清稀释系列相关。由于未观察到抗体的交叉反应性，因此建立了定量系统。另一方面，当使用已建立的测量系统测量接受禁食和重新喂养实验的樱桃鲑血液中的IGFBP-1A量时，未观察到生物学反应。这表明抗体识别IGFBP-1A的片段的可能性，并且需要一种仅检测生物活性IGFBP-1A的方法。此外，我们一直在建立结合多个指标的增长率评估系统。我们研究了IGF-I/BP-1B比与IGF-I和IGFBP-1B结合的响应，这表明这可能是反映与个人不同的“个体的代谢状态”的指标。