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高浸透圧ストレスで形成される新規細胞内構造体ＡＳＫ３グラニュールの解析

ASK3 颗粒的分析，一种由高渗应激形成的新型细胞内结构

基本信息

批准号：
16J08869
负责人：
椎崎繁
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J08869/
关键词：
MAP3K ASK3 浸透圧 HSP70

项目摘要

当研究室でストレス応答性MAPキナーゼ経路を構成する分子として同定されたASK3は低浸透圧や定常状態では細胞質に拡散して存在しているが、高浸透圧ストレスに応じて数分でグラニュール(ASK3グラニュール)を形成することが観察された。本研究ではASK3グラニュール構成因子を解析することで、ASK3を介する細胞の浸透圧ストレス応答におけるグラニュールの役割を解明することを目的とした。まずASK3グラニュールと既知の細胞内構造体との共局在性の検討を共焦点レーザー顕微鏡により行ったが、ASK3グラニュールと局在が一致するものは見出せなかった。また、電子顕微鏡観察によってもASK3グラニュールと共局在する細胞内小器官などは観察されなかった。次に、高浸透圧1時間におけるASK3グラニュールを単離・精製し、質量分析計で構成タンパク質の同定を行なったところ、HSP70と、HSP70の機能を補助するタンパク質として知られるBAG2が高いスコアで同定された。HSP70のシャペロン活性がASK3に与える影響を調べるため、HSP70阻害剤を処置した状態でイムノブロットを行なったところ、高浸透圧で阻害剤を処置すると不溶化するASK3が増えることが確認された。また、阻害剤処置時のASK3の局在を観察したところ、30分の高浸透圧刺激によりASK3グラニュールの浸透圧依存的な可逆性が失われることが確認された。HSP70が高浸透圧によるASK3の活性変化に影響を与えるか調べるため、阻害剤処置下でのASK3のリン酸化の程度を検討したところ、通常は高浸透圧でASK3が速やかに脱リン酸化されるのに対し、阻害剤処置によってASK3の脱リン酸化が抑制された。この結果から、HSP70が高浸透圧でASK3を正常な構造に保ち、ASK3の脱リン酸化を可能にする役割を持つことが示唆された。

When the molecular structure of the responsive MAP in the laboratory is constant, ASK3 is dispersed in the cytoplasm at low osmotic pressure and in the steady state, and the molecular structure of the responsive MAP in the laboratory is constant, ASK3 is dispersed in the cytoplasm at high osmotic pressure and in the steady state. The aim of this study is to analyze ASK3-mediated cellular permeability and cell viability. It is also evident that the coexistence of ASK3 molecules and known intracellular structures can be achieved through confocal microscopy, and the coexistence of ASK3 molecules and structures can be achieved consistently. Microscopic examination of ASK3 cells in a cell ASK3, ASK 4, ASK 5, ASK 7, ASK 8, ASK 9, ASK 9, ASK HSP70 's resistance to ASK 3 is determined by the presence of ASK 3. ASK3 is detected in the presence of a high saturation pressure stimulus at 30 minutes, and the reversibility of ASK3 is confirmed. HSP70 is a high saturation pressure ASK3 activity change, and the degree of ASK3 deactivation is discussed under inhibitor treatment. ASK3 deactivation is usually inhibited under high saturation pressure ASK3 deactivation. The results show that HSP70 has high permeability, ASK3 has normal structure, ASK3 has high permeability, ASK3 has normal structure, ASK3 has high permeability, ASK3 has normal structure, ASK3 has high permeability, ASK3 has normal structure, ASK3 has normal structure,