内在性核内受容体のケミカルラベリングによる動態・機能解析

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細胞内には、リソソームに代表される内部が酸性（pH 4.5~6.5）の各種オルガネラが存在し、細胞外からの物質の取り込み、細胞外への分泌、オートファジーによる細胞の恒常性維持などに関与し、多彩な機能を果たしている。細胞にとって重要な機構を担うリソソームの異常は、数多くの疾患に関与していると考えられている。特に、LSD（lysosomal storage disease）という、リソソームに関連した酵素が欠損することで分解されるべき物質が蓄積される状態に陥ると、様々な疾患に繋がることが知られている。したがって、リソソームのプロテオーム解析は、細胞機能や生命現象の解明において極めて大きな知見を与えると期待される。今回申請者は、リソソーム内の蛋白質を網羅的にラベル化、解析することを目的とし、酸性条件で活性化されるラベル化剤を開発した。α-ジアゾカルボニル基を有するこのラベル化剤は、酸性条件において活性種であるカルベンの生成が促進され、蛋白質をラベル化した。更に、ラベル化剤にリソソーム局在能を付与することで、生細胞系でリソソーム内蛋白質をラベル化することに成功した。