Proteomanalysen zur Identifikation und Charakterisierung von vakuolenspezifischen Transportproteinen

Annähernd 20- 30%阿勒Gene eines tierischen，pflanzlichen or der bakteriellen Genoms kodieren für integrale Membranproteine，die sowohl für den Stoffaustausch zwischen den Zellen als also uch innerhalb vertebraedener Zellorganellen verantwortlich sind.在拟南芥中，它的功能是。2/3的患者在接受了膜蛋白治疗后仍未痊愈。蛋白质的表达和局部化信息可以在植物体内的器官中发挥作用。在正常的细胞器中，只有膜蛋白可以被去除。本研究以拟南芥和甘蓝为材料，利用Ziel、Hilfe、Mass Spectrometrysen等方法，研究了植物细胞膜蛋白的表达。蛋白质在真空膜中的定位通过GFP-融合结构的组装验证。分析敲除突变体、反义bzw的转运蛋白的详细功能特性。RNA干扰和超表达的结果。电生理学对同种异体Vakuolen或Tonoplastvesikeln和Vakuolären Proteine在Hefe中的特性的研究表明，异种表达系统具有蛋白质的功能特性。

Annähernd 20-30 % aller Gene eines tierischen, pflanzlichen oder bakteriellen Genoms kodieren für integrale Membranproteine, die sowohl für den Stoffaustausch zwischen den Zellen als auch innerhalb verschiedener Zellorganellen verantwortlich sind. In Arabidopsis thaliana ist die Funktion von ca. 2/3 aller nach Vollendung des Arabidopsisgenomprojekts vorhergesagten Membranproteine noch unbekannt. Informationen über das Expressionsmuster und die subzelluläre Lokalisation dieser Proteine kann dazu beitragen, die Funktion im pflanzlichen Organismus in planta aufzuklären. Im Vergleich der verschiedenen Organellen sind bis jetzt nur wenige vakuoläre Membranproteine näher untersucht. Um Informationen über Membranproteine der Vakuole zu erhalten, werden wir Tonoplasten aus Arabidopsis thaliana und Brassica oleracea isolieren, mit dem Ziel, vakuoläre Transportproteine mit Hilfe von chromatographischen und massenspektrometrischen Analysen zu identifizieren. Die postulierte Lokalisation der Proteine in der Vakuolenmembran soll in einem zweiten Schritt durch die Herstellung von GFP-Fusionsstrukturen verifiziert werden. Anschließend wird eine detaillierte funktionelle Charakterisierung interessanter putativer Transporter über die Analyse von knock-out Mutanten, Antisense- bzw. RNAi-Pflanzen und Überexpressionspflanzen erfolgen. Zusätzliche elektrophysiologische Untersuchungen an isolierten Vakuolen oder Tonoplastvesikeln und die Charakterisierung der vakuolären Proteine in der Hefe als heterologes Expressionssystem vervollständigen die funktionelle Charakterisierung der Proteine.