Die Rolle der humanen Proteinkinase X: chemisch-genetische und proteomische Studien zur Identifikation von Substraten und Bindungspartnern

人蛋白激酶 X 的作用：化学遗传学和蛋白质组学研究，以确定底物和结合伴侣

• 批准号: 68851560
• 负责人: Professor Dr. Friedrich-Wilhelm Herberg
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2007-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/68851560?language=en
• 关键词: Die; Rolle; der; humanen; Proteinkinase

Mit 518 Genen stellen die Proteinkinasen die zweitgrößte Proteinfamilie im menschlichen Genom dar und haben zentrale Aufgaben in der Signaltransduktion sowie der Regulation des Stoffwechsels höherer Zellen. Dabei ist die cAMP-abhängige Proteinkinase (PKA) eine der am besten charakterisierten Proteinkinasen. Trotz des breiten Wissens über die Struktur und Biochemie der PKA-Hauptisoformen (Cα, Cβ) konnte die humane katalytische Isoform Proteinkinase X (PrKX) funktionell bisher nur in Ansätzen beschrieben werden. PrKX hat sich phylogenetisch zu einer eigenen PKA-Subfamilie entwickelt und zeigt einen ungewöhnlichen Regulationsmechanismus. Da es keine detaillierten Informationen zur Substratspezifität und über spezifische Interaktionspartner gibt, soll (1.) über einen chemisch-genetischen Ansatz versucht werden, spezifische Substrate selektiv zu markieren und mittels hochauflösender Massenspektrometrie zu identifizieren. Darüber hinaus sollen Substrate (2.) mittels Peptid- und Proteinarrays sowie Bindungspartner (3.) über ein neuartiges Yeast Two Hybrid-System und (4.) einen chemisch-proteomischen Ansatz identifiziert werden. Die Validierung potenzieller Bindungspartner soll in vitro über Oberflächenplasmonresonanz (SPR) und in vivo über Biolumineszenz Resonanz Energie Transfer (BRET) erfolgen. Putative Phosphorylierungsstellen sollen mit hochspezifischen Antikörpern detektiert oder massenspektrometrisch nachgewiesen werden. Diese Ergebnisse sollen als Basis für weitere funktionelle Untersuchungen zur Rolle von PrKX dienen.

Mit 518 Genen stellen die Proteinkinasen die zweitgrößte Proteinfamilie im menschlichen Genom dar and haben zentrale Aufgaben in der Signaltransduktion sowie der Regulation des Stoffwechsels höherer Zellen. Dabei是cAMP-abhängige Proteinkinase（PKA）的一个最好的特征蛋白激酶。PKA-Hauptisoform（Cα，Cβ）的结构和生物化学的新知识使人的催化异构体蛋白激酶X（PrKX）在临床上仅具有韦尔登。PrKX hat sich genetisch zu einer eigenen PKA-Subfamilie entwickelt and zeigt einen ungewöhnlichen Regulationsmechanismus. Da es keine detaillierten Informationen zur Substratspezifität und über spezietheInteraktionspartner gibt，soll（1.）韦尔登是一种化学遗传学分析方法，专门用于标记选择性底物，并用于鉴定底物。（2.）mittels Peptid- und Proteinarrays sowie Bindungspartner（3.）一个新的酵母双杂交系统和（4.）一种化学-蛋白质组学标记物鉴定韦尔登。通过体外SPR和体内BRET两种方法验证有效结合。推定的磷酰化试剂可通过高特异性Antikörpern检测或质谱测定来进行韦尔登。这一工作是PrKX应用的基础。