Die Rolle der humanen Proteinkinase X: chemisch-genetische und proteomische Studien zur Identifikation von Substraten und Bindungspartnern

人蛋白激酶 X 的作用：化学遗传学和蛋白质组学研究，以确定底物和结合伴侣

• 批准号: 68851560
• 负责人: Professor Dr. Friedrich-Wilhelm Herberg
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2007-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/68851560?language=en
• 关键词: Die; Rolle; der; humanen; Proteinkinase

Mit 518 Genen stellen die Proteinkinasen die zweitgrößte Proteinfamilie im menschlichen Genom dar und haben zentrale Aufgaben in der Signaltransduktion sowie der Regulation des Stoffwechsels höherer Zellen. Dabei ist die cAMP-abhängige Proteinkinase (PKA) eine der am besten charakterisierten Proteinkinasen. Trotz des breiten Wissens über die Struktur und Biochemie der PKA-Hauptisoformen (Cα, Cβ) konnte die humane katalytische Isoform Proteinkinase X (PrKX) funktionell bisher nur in Ansätzen beschrieben werden. PrKX hat sich phylogenetisch zu einer eigenen PKA-Subfamilie entwickelt und zeigt einen ungewöhnlichen Regulationsmechanismus. Da es keine detaillierten Informationen zur Substratspezifität und über spezifische Interaktionspartner gibt, soll (1.) über einen chemisch-genetischen Ansatz versucht werden, spezifische Substrate selektiv zu markieren und mittels hochauflösender Massenspektrometrie zu identifizieren. Darüber hinaus sollen Substrate (2.) mittels Peptid- und Proteinarrays sowie Bindungspartner (3.) über ein neuartiges Yeast Two Hybrid-System und (4.) einen chemisch-proteomischen Ansatz identifiziert werden. Die Validierung potenzieller Bindungspartner soll in vitro über Oberflächenplasmonresonanz (SPR) und in vivo über Biolumineszenz Resonanz Energie Transfer (BRET) erfolgen. Putative Phosphorylierungsstellen sollen mit hochspezifischen Antikörpern detektiert oder massenspektrometrisch nachgewiesen werden. Diese Ergebnisse sollen als Basis für weitere funktionelle Untersuchungen zur Rolle von PrKX dienen.

麻省理工学院518基因突变蛋白激酶突变zweitgrößte基因突变蛋白家族基因突变与基因突变在信号转导中的作用及调控作用höherer Zellen。dabbei ist die cAMP-abhängige蛋白激酶（PKA）是一种具有最佳特性的蛋白激酶。Trotz des breiten Wissens, ber die Struktur and Biochemie der PKA-Hauptisoformen (Cα, Cβ) konte die human catalyst Isoform Proteinkinase X （PrKX）的功能在Ansätzen beschrieben werden。PrKX认为，这种系统发育是由pka -亚家族的两个特征组成的，它们的结构和长度是相同的ungewöhnlichen调控机制。Da es keine detail - listen Informationen zur Substratspezifität and ber spezifische interaktionpartner gibt . (1)<s:2>化学遗传学研究进展，底物选择性研究进展hochauflösender质谱分析进展进展。darber hinus sollen底物(2)mittels peptide - und Proteinarrays sowie binding partner (3)(4)酵母化学-蛋白组学研究进展。体外<s:1> ber Oberflächenplasmonresonanz （SPR）和体内<e:1> ber生物发光共振能量转移（BRET） erfolgen。假定的磷离子浓度为1 / 2 / 1 / 2 / 1 / 2 / 1 / 2 / 1 / 2。在此基础上，我们提出了一种新的研究方法，用于研究人类的生理机能。