Optimierung von RNAi-Methode zur Durchführung funktioneller Genomik in Erdbeerfrüchten

in Vorantrag konnte gezeigt werden, dass das Einschleusen von doppelsträngiger RNA, die respondierend zu spezifischen endogengensequenzen ist, zur Inhibierung der ensprechenden Genfunktion in erdbeerfrichen fhrt。herbei wurden Konstrukte mittelels Agrobakterien in unreife frachte chte eingebracht， die umgekehrt angeordnete Kopien eines Transgens mit einem内含子间隔子、间隔子、内含子启动子（内含子发夹RNA Konstrukt， ihpRNA） transkribieren。rna -干扰素干扰素基因的功能分析，包括：基因、色素合成酶(FaCHS)-、花青素合成酶(FaANS)-和糖基转移酶(FaGT1)-。病毒基因组中pflangengensequence的整合、RNA-Virus和pflangengengensequence的感染（病毒诱导基因沉默，VIGS）均具有丰富的临床意义。[3] [weiterfhrung dieseer arbeen] .德国科学与技术研究所，德国科学与技术研究所，德国科学与技术研究所，德国科学与技术研究所，德国科学与技术研究所，können.]因此，soll durch Verwendung verschiedener definiter Sequenzabschnitte der FaCHS and des methyltransferasegens (FaOMT) diejenigen teilst<e:1>, identifiziert werden, die frine erfolgreiche Herabregulation der pflanzeneigengene als doppelsträngige RNA vorliegen mssen。weiterinist geplant die hierbei erzielten Ergebnisse f<e:1> r die Ausschaltung verschiedener Gene des flavonidstoffhersels (FaANR, FaLAR, FaDFR) and mit bisher unbekannten Funktionen (FaGT3, FaGT4) and zuwenden。[2] [endnoter.cn/cn/y2012.html] [endnoter.cn/y201.cn/y201.cn/y201.cn/y201.cn/y201.cn/y2012.html]平行大祖与VIGS-System相结合，使细胞发育发育，细胞功能发育，细胞功能发育，细胞功能发育。[2] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [4]禽流感病毒载体系统的研究进展。

Im Vorantrag konnte gezeigt werden, dass das Einschleusen von doppelsträngiger RNA, die korrespondierend zu spezifischen endogenen Gensequenzen ist, zur Inhibierung der entsprechenden Genfunktion in Erdbeerfrüchten führt. Hierbei wurden Konstrukte mittels Agrobakterien in unreife Früchte eingebracht, die umgekehrt angeordnete Kopien eines Transgens mit einem Intron als Spacer hinter einem starken Promotor (intron hairpin RNA Konstrukt, ihpRNA) transkribieren. Diese spezielle Technik der RNA-Interferenz eignet sich zur Funktionsanalyse von reifekorrelierten Genen wie dies beispielhaft an einem Chalkonsynthase (FaCHS)-, Anthocyanidinsynthase (FaANS)- und Glucosyltransferase (FaGT1)-Gen demonstriert wurde. Auch die Integration der Pflanzengensequenz in das virale Genom eines RNA-Virus und die Infektion der Pflanzen mit diesem rekombinanten Virus (virus-induced gene silencing, VIGS) verliefen erfolgreich. In Weiterführung dieser Arbeiten ist das Ziel des vorliegenden Projektes die Effizienz der Methoden zu optimieren um diese für Hochdurchsatz-Verfahren nutzen zu können. So soll durch Verwendung verschiedener definierter Sequenzabschnitte der FaCHS und des OMethyltransferasegens (FaOMT) diejenigen Teilstücke identifiziert werden, die für eine erfolgreiche Herabregulation der pflanzeneigenen Gene als doppelsträngige RNA vorliegen müssen. Weiterhin ist geplant die hierbei erzielten Ergebnisse für die Ausschaltung verschiedener Gene des Flavonoidstoffwechsels (FaANR, FaLAR, FaDFR) und mit bisher unbekannten Funktionen (FaGT3, FaGT4) anzuwenden. Es sollen jeweils die Auswirkungen der Herabregulation auf die mRNA-, Protein- und Metabolitengehalte untersucht werden. Parallel dazu wird das VIGS-System weiter entwickelt da hiermit auch die Funktion derjenigen Gene untersucht werden kann, die in der frühen Reifungsphase exprimiert werden. Die Untersuchungen führen auch zu Erkenntnissen der Replikation und Ausbreitung des SMYEV in Erdbeeren in zeitlicher Hinsicht nach Infektion sowie zur Akkumulation in verschiedenen Pflanzenorganen. Gleichzeitig wird die Eignung des bislang einzigen Virus-Vektorsystems in Erdbeeren untersucht.