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ゲノム編集技術を基盤とした次世代型トランスジェニック動物作製技術の開発

基于基因组编辑技术的下一代转基因动物生产技术开发

基本信息

批准号：
17J02822
负责人：
重田美津紀
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J02822/
关键词：
ゲノム編集ツメガエルセーフハーバー

项目摘要

遺伝子機能の解析法として外来遺伝子の挿入は有効な手段である。両生類においては、メガヌクレアーゼISce-Iや精子核移植法によるトランスジェネシスが主流である。しかしながら、この方法は挿入されるコピー数やゲノム上の位置を指定できない。加えて、位置効果により外来遺伝子がF1以降にサイレンシングを受けるとの報告が多数ある。ヒトのAAVS locusやマウスのRosa26への外来遺伝子導入に相当する、「Safe harbor system」が逆遺伝学的ストラテジーを用いた今後の両生類研究において必要不可欠であるが、未だ確立されていない。そこで、外来遺伝子を安定的に発現する個体レベルでのシステムを確立するため、ネッタイツメガエルのセーフハーバー領域へのリコンビナーゼの認識配列の挿入をCRISPR-Cas9を用いて試みた。すでに研究室では、CRISPR-Cas9を用いた標的遺伝子へのレポーター遺伝子の挿入システムを確立しており、この方法を用いてセーフハーバー領域へのレポーター遺伝子のノックインを実施した。ノックインが成功すれば目にRFPが発現するはずであったが、明確な蛍光を観察することはできなかった。一方、実験個体においてゲノム配列を確認したところ、予定されている配列が検出されたため、ノックイン自体は成功していることが確認できた。これらの結果から、セーフハーバーと考えられた候補の部位においてもノックインされたレポーター遺伝子の構造によって、発現が抑制されている可能性と、挿入される際にレポーター遺伝子等に予期せぬ変異が導入されている可能性が考えられた。

The sub-machine can be used as an analytical method to ensure that there is a means for the import of foreign workers. The method of sperm nuclear transplantation is very important to the mainstream of the ISce-I. Please specify the location of the upper location by entering the location, the method and the location. Add information, location, location, location and location. In the future, it is necessary to make sure that it is necessary to pay more attention to the import and export of foreign students. In the future, it is necessary to make sure that the information is not available in the future. For example, if you are in a stable environment, you will be able to make sure that you have registered your identity in the CRISPR-Cas9. In the laboratory and CRISPR-Cas9, you need to make sure that the information is available in the research lab and in the field of the laboratory. In the first place, you can see that the RFP is in good condition. Please make sure that you are aware that you are in a bad situation. On the other hand, one party and

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Developmental changes in drug-metabolizing enzyme expression during metamorphosis of <i>Xenopus tropicalis </i>

热带爪蟾变态过程中药物代谢酶表达的发育变化

DOI：
10.2131/jts.42.605
发表时间：
2017
期刊：
The Journal of Toxicological Sciences
影响因子：
0
作者：
Mori J.;Sanoh S.;Kashiwagi K.;Hanada H.;Shigeta M.;Suzuki K.;Yamamoto T.;Kotake Y.;Sugihara K.;Kitamura S.;Kashiwagi A.;Ohta S.
通讯作者：
Ohta S.

ネッタイツメガエルの変態におけるatg5とatg7の関与

atg5和atg7参与埃及伊蚊的变态