カイコの複製分子基盤の解明と人工染色体構築

本研究では、産業昆虫であるカイコにおいて使用できるカイコ人工染色体の作製とカイコDNA複製機構の解明を目的として研究を行っている。カイコ内在染色体を短縮化しカイコ人工染色体として利用する計画を立てており、これにカイコBACを利用することにした。カイコBACは大腸菌DNA複製起点が挿入されたカイコ内在染色体を短縮化したものと考えることができ、このカイコBACの中からカイコ細胞内で維持されるものを選抜すればカイコ人工染色体の土台として使用することができるのではないかと考えた。カイコBACの中でもカイコ染色体の中で一番短い二番染色体に対応するカイコBACの中から選抜することとし、制限酵素DpnIとq-PCRを用いてカイコ培養細胞内で複製されているカイコBACを見つけ出すことにした。結果として、カイコ培養細胞で複製が行われていると思われるカイコBACを複数選抜することができた。このカイコBACの中にはカイコDNA複製起点が含まれていると考えられ、カイコBACのDNA配列を比較・検討することでカイコDNA複製機構の解明につながることが期待される。今回は、カイコ培養細胞で実験を行なったが、カイコ個体（具体的には卵）に選抜したカイコBACを打ち込み、長期間安定にカイコBACが維持されるかどうかを確認することで、カイコ人工染色体として利用できるかどうかを確かめることができる。このカイコ人工染色体はすでに大腸菌DNA複製起点を含んでいるため、大腸菌・カイコで使用できるシャトルベクターとして利用することができる。また、長期間安定にカイコ細胞内で維持されるということは、DNA複製起点と動原体領域を含んでいることが予想され、カイコ動原体研究へも有益な情報を提供できる可能性がある。

本研究では、産業昆虫であるカイコにおいて使用できるカイコ人工染色体の作製とカイコDNA複製機構の解明を目的として研究を行っている。カイコ内在染色体を短縮化しカイコ人工染色体として利用する計画を立てており、これにカイコBACを利用することにした。カイコBACは大腸菌DNA複製起点が挿入されたカイコ内在染色体を短縮化したものと考えることができ、このカイコBACの中からカイコ細胞内で維持されるものを選抜すればカイコ人工染色体の土台として使用することができるのではないかと考えた。カイコBACの中でもカイコ染色体の中で一番短い二番染色体に対応するカイコBACの中から選抜することとし、制限酵素DpnIとq-PCRを用いてカイコ培養細胞内で複製されているカイコBACを見つけ出すことにした。結果として、カイコ培養細胞で複製が行われていると思われるカイコBACを複数選抜することができた。このカイコBACの中にはカイコDNA複製起点が含まれていると考えられ、カイコBACのDNA配列を比較・検討することでカイコDNA複製機構の解明につながることが期待される。今回は、カイコ培養細胞で実験を行なったが、カイコ個体（具体的には卵）に選抜したカイコBACを打ち込み、長期間安定にカイコBACが維持されるかどうかを確認することで、カイコ人工染色体として利用できるかどうかを確かめることができる。このカイコ人工染色体はすでに大腸菌DNA複製起点を含んでいるため、大腸菌・カイコで使用できるシャトルベクターとして利用することができる。また、長期間安定にカイコ細胞内で維持されるということは、DNA複製起点と動原体領域を含んでいることが予想され、カイコ動原体研究へも有益な情報を提供できる可能性がある。