权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

糖尿病細胞療法の実現に向けたヒトｉＰＳ細胞由来膵前駆細胞の増殖機構の解明

阐明人iPS细胞来源的胰腺祖细胞的增殖机制，以实现糖尿病细胞治疗

基本信息

批准号：
17J07622
负责人：
木村東
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J07622/
关键词：
ES細胞 iPS細胞糖尿病膵前駆細胞増殖低分子化合物 siRNA スクリーニング

项目摘要

安価で安定かつ効率的なヒトiPS細胞由来膵細胞の供給源開発には、膵前駆細胞の増殖機構の解明が不可欠である。第二年度では、ヒトiPS細胞由来膵前駆細胞の増殖を特異的に促進する低分子化合物AT7867の標的因子を網羅的遺伝子発現差解析から抽出し、第一年度に構築したsiRNAスクリーニング系を用いて遺伝子の特定を試みた。遺伝子発現解析の結果、化合物処理は膵前駆細胞においてDNA複製や細胞周期、そしてヘッジホッグおよびWnt、TGFβシグナルに関わる遺伝子群の発現に影響し、細胞増殖に影響し得る計590の変動遺伝子を抽出した。これら候補遺伝子に対するsiRNAのスクリーニングの結果、計19の化合物の作用を阻害するsiRNAを得た。そのうちの一つであるWntリガンド遺伝子に対するsiRNAは再現性を持って膵前駆細胞の増殖を阻害していたことから、化合物の下流で作用する因子の一つである可能性が考えられた。リコンビナントタンパク質は生理活性が低いことから、恒常的にこのリガンドを発現するマウス線維芽細胞株3T3をフィーダー細胞として用いる共培養実験を行った。すると、コントロール株に比して細胞数が顕著に増加しており、膵前駆細胞の指標遺伝子を発現していたことから、前駆細胞の特性を維持しながら細胞を増殖させることが可能である。さらに、フィーダー細胞を用いた膵前駆細胞の継代培養を試みたところ、約50日間、10回の継代培養によって膵前駆細胞数が約1,000万倍、コントロール株と比べても約500倍以上も増加させることができた。以上、本研究により、ヒトiPS細胞由来膵前駆細胞における化合物AT7867の下流因子としてWnt経路がその増殖に寄与している可能性を見出した。今後は、無血清完全培地の開発や増殖機序の詳細が明らかにできるものと期待され、糖尿病に対する再生医療の実現に貢献し得ると考えられる。

The stability and efficiency of iPS cells are due to the development of cell supply sources and the understanding of cell growth mechanisms. In the second year, iPS cells were isolated from the target gene AT7867, which was specifically promoted by the proliferation of previous cells. In the first year, siRNAs were constructed and used in specific gene tests. The results of gene expression analysis, compound treatment on the former cell in the DNA replication and cell cycle, the impact of Wnt, TGFβ-related gene subgroup development, cell proliferation impact, more than 590 mobile gene extraction The results of this study indicate that siRNAs can inhibit the effects of 19 compounds. The possibility of a factor affecting the reproducibility of siRNA and its downstream effects on cell proliferation is examined. The cell line 3T3 is co-cultured with the cell line 3T3. The cell line 3T3 is co-cultured with the cell line 3T3. The number of cells in the cell line increased, and the index gene of the cells in the cell line increased. The characteristics of the cells in the cell line increased. The number of pre-culture cells increased by about 50 times in the first 10 days of culture, and the number of pre-culture cells increased by more than 500 times in the second half of culture. In this study, the possibility that AT7867 is a downstream factor in the growth and development of iPS cells derived from pre-existing cells was revealed. In the future, the development of serum-free complete culture will be discussed in detail, and the contribution to the realization of regenerative medicine in diabetes will be discussed.