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糖尿病細胞療法の実現に向けたヒトｉＰＳ細胞由来膵前駆細胞の増殖機構の解明

阐明人iPS细胞来源的胰腺祖细胞的增殖机制，以实现糖尿病细胞治疗

基本信息

批准号：
17J07622
负责人：
木村東
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J07622/
关键词：
ES細胞 iPS細胞糖尿病膵前駆細胞増殖低分子化合物 siRNA スクリーニング

项目摘要

安価で安定かつ効率的なヒトiPS細胞由来膵細胞の供給源開発には、膵前駆細胞の増殖機構の解明が不可欠である。第二年度では、ヒトiPS細胞由来膵前駆細胞の増殖を特異的に促進する低分子化合物AT7867の標的因子を網羅的遺伝子発現差解析から抽出し、第一年度に構築したsiRNAスクリーニング系を用いて遺伝子の特定を試みた。遺伝子発現解析の結果、化合物処理は膵前駆細胞においてDNA複製や細胞周期、そしてヘッジホッグおよびWnt、TGFβシグナルに関わる遺伝子群の発現に影響し、細胞増殖に影響し得る計590の変動遺伝子を抽出した。これら候補遺伝子に対するsiRNAのスクリーニングの結果、計19の化合物の作用を阻害するsiRNAを得た。そのうちの一つであるWntリガンド遺伝子に対するsiRNAは再現性を持って膵前駆細胞の増殖を阻害していたことから、化合物の下流で作用する因子の一つである可能性が考えられた。リコンビナントタンパク質は生理活性が低いことから、恒常的にこのリガンドを発現するマウス線維芽細胞株3T3をフィーダー細胞として用いる共培養実験を行った。すると、コントロール株に比して細胞数が顕著に増加しており、膵前駆細胞の指標遺伝子を発現していたことから、前駆細胞の特性を維持しながら細胞を増殖させることが可能である。さらに、フィーダー細胞を用いた膵前駆細胞の継代培養を試みたところ、約50日間、10回の継代培養によって膵前駆細胞数が約1,000万倍、コントロール株と比べても約500倍以上も増加させることができた。以上、本研究により、ヒトiPS細胞由来膵前駆細胞における化合物AT7867の下流因子としてWnt経路がその増殖に寄与している可能性を見出した。今後は、無血清完全培地の開発や増殖機序の詳細が明らかにできるものと期待され、糖尿病に対する再生医療の実現に貢献し得ると考えられる。

The origin of the tranquilizer iPS cell of the tranquilizer population is that the cell is available for the source to open, and the former cell colonization mechanism has made it clear that it must not be in arrears. The origin of iPS cells in the second year. The factors that promote the proliferation of low molecular compounds AT7867 in the first year, which promote the growth of low molecular compounds, have been analyzed by differential analysis. In the first year, they have been analyzed and analyzed. In the first year, they have been used in the first year, and in the first year. The results of the analysis of the results, the cell cycle of DNA replication, the cell cycle of DNA, the subgroup of TGF β-DNA, the subgroup of TGF β-DNA, and the molecular weight of 590% were obtained. The results show that the compound has a potent effect on siRNA. The results show that the compound has an inhibitory effect on siRNA. In the first place, there is a question of Wnt, and then there is a study of the possibility that the compound has an indecent effect on the cells in front of the cell, and the possibility of infection. The physiological activity is low, the physiological activity is low, the constant physiological activity is low, and the constant physiological activity is similar to that of the sprout cell line 3T3. In terms of the number of cells, the number of cells. The number of pre-culture cells was 10 million times higher than that of pre-culture cells within about 50 days and 10 times of culture time. In this study, the origin of the iPS cell, the former cell, the compound AT7867, the downflow factor, the Wnt pathway, the colonization, the possibility, the origin, the origin, the origin, In the future, the serum will be fully cultivated and the reproductive mechanism will be fully opened. You will be able to find out that you are looking forward to it, and the regenerative medicine for diabetes mellitus will be able to make a successful donation.