新規ターゲット因子に着目した化学物質の神経毒性評価系構築と生体リスク評価

聚焦新目标因子的化学物质神经毒性评价体系构建及生物风险评估

• 批准号: 18J01790
• 负责人: 石田 慶士
• 金额: $ 2.33万
• 依托单位: Gifu Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J01790/
• 关键词: 核呼吸因子ー１; 毒性評価系; 核呼吸因子-1; NRF-1; UBE2D1

令和2年度は構築したNRF-1活性評価系を用いて十数種類の化合物について小規模スクリーニングを試みた。レポータープラスミドを導入したNeuro2A細胞に様々な濃度の各化合物を曝露し、死細胞染色色素であるPropidium Iodideの蛍光強度とEGFPの蛍光強度を測定することで、細胞生存率とNRF-1活性の用量反応曲線を作成した。その結果、①細胞死が起きるよりも低い濃度でNRF-1活性が低下した化合物群、②検討した濃度では細胞死は起きなかったがNRF-1活性は低下した化合物群、③細胞死と同時にNRF-1活性が低下した化合物群の３つの群に被験物質を分類することができた。③の群は細胞死が原因でEGFPの蛍光が低下したと考えられるが、①と②の群は細胞死が起きる前段階でNRF-1活性が特異的に低下したと考えられる。以上の結果より、一部の化学物質がNRF-1活性阻害作用のポテンシャルを有することが明らかとなった。本研究課題は令和2年度で終了するが、引き続き化合物数を増やしてNRF-1活性評価の大規模スクリーニングを行い、NRF-1活性を阻害する化学物質を探索する予定である。さらに令和2年度はNRF-1の新規下流遺伝子として既に同定しているUBE2D1遺伝子のプロモーター解析を引き続き進め、UBE2D1プロモーター上のNRF-1結合配列の同定を試みた。UBE2D1プロモーターの一部領域を組み込んだ複数のレポータープラスミドを作製しレポーターアッセイを行ったところ、既知のNRF-1結合配列と類似したGCリッチな14bpのDNA配列においてNRF-1に対する応答性が認められた。以上より、UBE2D1発現はNRF-1により直接的に制御されており、NRF-1はUBE2D1発現調節を介してタンパク質分解系に関与している可能性が明らかとなった。

Ling and the annual NRF-1 activity test is based on the use of more than ten kinds of chemical compounds. In this study, Neuro2A cells were exposed, dead cells were stained with pigments, Propidium Iodide cells were stained, light intensity was measured by EGFP, cell survival rate, NRF-1 activity, and cell survival rate were measured. The results showed that the compound group with low NRF-1 activity, the compound group, the group, the group. 3. The cause of cell death is EGFP, the light is low, the cell is dead, the population is 1, 2, the NRF-1 activity is low, the activity of the cell is low. The results of the above results show that there is a study on the protective effect of chemicals on NRF-1 activity. In this study, the number of compounds, the activity of NRF-1, the activity of NRF-1, the activity of chemical compounds, the number of compounds, The new regulations of the NRF-1 and the new regulations of the year of the year have not only introduced the data analysis system of the UBE2D1 system, but also combined the NRF-1 with the test data of the UBE2D1 system. In the field of UBE2D1, there is a significant difference in the number of copies of the data. The combination of NRF-1 and DNA is similar to that of GC. The configuration of 14bp is similar to that of NRF-1. The above information and UBE2D1 show that the direct control and control of the NRF-1 system, the NRF-1 UBE2D1 system, and the possibility that the system is decomposed.

项目成果

In vivo profiling of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced estrogenic/anti-estrogenic effects in female estrogen-responsive reporter transgenic mice.

• DOI: 10.1016/j.jhazmat.2019.121526
• 发表时间: 2019-10
• 期刊: Journal of hazardous materials
• 影响因子: 13.6
• 作者: Ichiro Yoshida;K. Ishida;Hiroshi Yoshikawa;S. Kitamura;Youhei Hiromori;Yasushi Nishioka;A. Ido

核呼吸因子-1 (NRF-1)によるユビキチン結合酵素D1 (UBE2D1)の発現制御

核呼吸因子 1 (NRF-1) 对泛素结合酶 D1 (UBE2D1) 表达的调节

• 发表时间: 2019
• 作者: 木戸口 直弘;石田 慶士;花岡 早紀;斎木 崇史;太田 茂;古武 弥一郎;石田 慶士，齋木 崇史，中西 剛，太田 茂，古武 弥一郎
• 通讯作者: 石田 慶士，齋木 崇史，中西 剛，太田 茂，古武 弥一郎

トリフェニルスズによる転写因子GA-binding proteinの核移行阻害を介した 新規毒性メカニズム解明

阐明三苯基锡抑制转录因子 GA 结合蛋白核转位介导的新毒性机制

• 发表时间: 2019
• 作者: 木戸口 直弘;石田 慶士;花岡 早紀;斎木 崇史;太田 茂;古武 弥一郎
• 通讯作者: 古武 弥一郎