新規修飾アンチセンスを用いた標的選択的なRNAグアニン四重鎖安定化法の開発

使用新型修饰反义开发目标选择性 RNA 鸟嘌呤四链体稳定方法

基本信息

批准号：
22K05326
负责人：
萩原正規
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05326/
关键词：
アンチセンス核酸グアニン四重鎖遺伝子発現制御

项目摘要

グアニン塩基に富むRNA配列は、DNA同様にグアニン四重鎖構造を形成することが知られている。ゲノムから転写されたmRNA配列中に存在するグアニン塩基に富む領域は安定なグアニン四重鎖構造を形成し、リボソームによるタンパク質への翻訳過程を阻害することが近年明らかにされ、グアニン四重鎖構造は遺伝子発現等に重要な役割を果たすことが理解されつつある。本研究では、予めグアニン四重鎖を形成するように設計した配列（例えば5'-GGGtGGGtGGGtGGG）を、アンチセンス核酸の末端部に導入した新たなアンチセンス核酸を作製し、タンデム型グアニン四重鎖構造体を人工的に模倣したRNA-DNAヘテロタンデム型四重鎖構造体を設計し、RNA中へのタンデム型グアニン四重鎖構造形成能、および、タンデム型四重鎖構造形成が遺伝子発現に及ぼす影響を解析することを目標としている。本年度は　アンチセンスの5'末端側に導入したグアニン四重鎖構造の安定性に応じて、RNA中に形成されるグアニン四重鎖構造の安定性が変化することを逆転写酵素とキャピラリー電気泳動法を利用した構造解析法により明らかにした。また、アンチセンス領域を欠損させたグアニン四重鎖構造体のみでは安定なタンデム型グアニン四重鎖構造体形成は認められず、アンチセンス領域によるRNAとの配列特異的な２重鎖構造形成が、安定なRNA-DNAヘテロタンデム型四重鎖構造体形成に必要不可欠であることを明らかにした

众所周知，鸟嘌呤碱基的RNA序列形成类似于DNA的鸟嘌呤四链体结构。最近已经透露，从基因组转录的mRNA序列中富含鸟嘌呤碱基的区域形成了稳定的鸟嘌呤四链体结构，并抑制核糖体向蛋白质抑制翻译过程，并且越来越明显的是，鸟嘌呤四元素结构在基因表达中起重要作用。在这项研究中，我们旨在创建一种新的反义核酸，其中设计用于形成鸟嘌呤四链体的序列（例如，5'-ggtgggtggtggtgg）在反义核酸的终端处引入鸟嘌呤四链体结构至RNA以及形成串联四链体结构对基因表达的影响。今年，我们透露，在RNA变化中形成的鸟嘌呤四链体结构的稳定性取决于使用逆转录酶和毛细管电的结构分析方法在反义的5'端端引入的鸟嘌呤四链体结构的稳定性。此外，未观察到与反义区缺乏鸟嘌呤四链体结构稳定的鸟嘌呤四链体结构的形成，并且没有观察到反义区域，并且揭示了反鉴定稳定的RNA-DNA DNA netra neterotandem QuadRuplex QuadRuplex QuadRuplex Quad Quad Quad Quad Quad Quad Quad Quadsive sequence特异性双链结构与RNA形成至关重要。