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Development of rapid screening method to discover peptides capable of binding to target proteins using split intein

开发快速筛选方法以发现能够利用分裂内含肽结合靶蛋白的肽

基本信息

批准号：
22K05344
负责人：
高橋剛
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

分割インテインは、2つのポリペプチド鎖をprotein trans-splicing (PTS) 反応で連結させる酵素様のタンパク質である。申請者は、分割インテインを用いた、リガンド－タンパク質間相互作用検出系の開発を進めている。改変型分割インテインに、相互作用を調べたいペプチドとタンパク質を融合することで、ペプチド－タンパク質間の相互作用に依存してPTS反応が進行する系を構築した。反応の生成物として、カナマイシン耐性遺伝子産物であるaminoglycoside-3’-phosphotransferase IIIa（APH(3’)-IIIa; 以下APH）を用いることで、ペプチド－タンパク質間の相互作用を大腸菌の生存を指標として検出できる。R4年度は、この方法を用いて、がん関連タンパク質であるMDM2に結合するペプチドの探索を実施した。ペプチドライブラリをコードする遺伝子ライブラリを作製し、MDM2との結合スクリーニングを行った。ライブラリ中のMDM2結合ペプチドとMDM2が相互作用することで、活性型APHが生成し、カナマイシン含有培地中でも大腸菌が生存できると期待した。形質転換した大腸菌をカナマイシン含有寒天培地で培養し、得られたコロニーからペプチド配列を解析した。その結果、MDM2に強く結合するペプチドを複数種類獲得することに成功した。また、得られたペプチドを化学合成し、MDM2との解離定数を算出した。R5年度は、得られたペプチドが実際に細胞内でMDM2に結合し、細胞のアポトーシスを誘導するか、検討する予定である。

Split the protein trans-splicing (PTS) in the first place and then reverse the enzyme in the enzyme chain. The applicant, the applicant, the customer, the customer, the applicant, the applicant, the applicant The modified segmentation mechanism, the interaction mechanism, the fusion protocol, the interaction mechanism, the PTS dependence protocol, the interaction protocol, the interaction protocol, the interaction Reverse the use of aminoglycoside-3'-phosphotransferase IIIa (APH (3')-IIIa; below APH) to reverse the interaction between products such as endurance products and endurance products. In the R4 year, the methods were used to explore and implement the information in combination with the combination of the MDM2 and the information technology. Please tell me that you need to learn how to do this, and that MDM2 can be used in combination with other information. In this study, MDM2 was combined with MDM2 interaction, active APH production, and bioactive DNA production were detected. The shape of the fungus, the fungus, the earth, and the earth. The result of the test, the combination of MDM2 and the replication of several kinds of data are successful. The chemical synthesis and MDM2 dissociation number were calculated. In the R5 year, the results show that the combination of the intracellular MDM2, the cell cycle and the predetermined temperature of the cell.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

分割インテインとカナマイシンキナーゼの再構成を利用した新規リガンド探索法の構築

利用分裂内含肽构建新的配体发现方法并重建卡那霉素激酶

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
信澤佳奈;渡辺雄太郎;高橋剛
通讯作者：
高橋剛

Luminescence detection of peptide:<i>N</i>-glycanase activity using engineered split inteins

使用工程化的分裂内含肽发光检测肽：<i>N</i>-聚糖酶活性

DOI：
10.1039/d2cc04865e
发表时间：
2022
期刊：
Chemical Communications
影响因子：
4.9
作者：
Takahashi Tsuyoshi;Uchibayashi Tatsuya;Ishii Nozomi;Matsuo Ichiro;Yoshida Yukiko;Suzuki Tadashi
通讯作者：
Suzuki Tadashi

Selection of peptides capable of binding to MDM2 using an engineered split intein

使用工程化的分裂内含肽选择能够结合 MDM2 的肽