感覚運動統合を制御する大脳皮質-高次視床核路の分子発生機構

控制感觉运动整合的大脑皮层-丘脑上核束的分子发育机制

• 批准号: 22K06242
• 负责人: 林 周一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06242/
• 关键词: 海馬; シナプス終末; 小胞放出; SBF-SEM; 大脳皮質; 視床

海馬における神経回路のシナプス形成の分子制御機構を明らかにするために、まず、子宮内電気穿孔法を用いて海馬のCA3領域に蛍光タンパク質を導入し、シナプス終末の形態を解析した。その結果、軸索で小胞放出を抑制したマウスでは、シナプス前終末と後終末の形態形成が阻害されることが分かった。このことは、シナプス前終末からの小胞放出がシナプス後終末の形態形成にも重要であることを示唆する。次に、蛍光顕微鏡で観察された形態異常の詳細を明らかにするために、Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM)を用いて、シナプス終末の3次元微細形態解析を行った。材料は上記と同様に、シナプス前終末からの小胞放出を抑制し、同時にその軸索を蛍光タンパク質で標識されるように遺伝子改変したマウスを用いた。成獣のホモ接合型と同腹のヘテロ接合型の各２匹を灌流固定し、取り出した脳をスライスした。その後、申請者がスイスのGraham Knott博士らと開発した光－電子顕微鏡相関法（MacLachlan et al., 2018）による観察を行った。まず、光学顕微鏡を用いて目印となる血管や細胞を撮影した。さらに、蛍光標識されたシナプス前終末の共焦点顕微鏡像を取得した。その後、生理学研究所において、スライスを電子顕微鏡観察用に染色し、樹脂包埋を行った。SBF-SEM観察では、血管や細胞体の位置を目印にして、事前に取得した蛍光顕微鏡像の領域を探し、30 nmごとの連続電子顕微鏡画像を取得した。その結果、小胞放出を抑制したマウスでは、シナプス終末形態が異常になることが分かった。

The molecular control mechanism of the hippocampal circuit of the seahorse, the molecular control mechanism of the hippocampus, and the intrauterine electricity The perforation method uses いて海马のCA3 domain に荍光タンパク性を Introduction and シナプスTerminal morphology をanalysis した. As a result, the release of axonal cells is inhibited, the morphology of the anterior terminal and posterior terminal is inhibited, and the morphology of the terminal is inhibited.このことは, シナプス former end からの cells release がシナプス rear end の form formation にもimportant であることをshows 唆する. Tsutomu, Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM) を行った using いて and シナプス朮恮3-dimensional fine morphology analysis. The material mentioned above is the same as the same one, the last one is the last one, the cell release is suppressed, and the same one is the same one. Axon を蛍光タンパク性でLOGO されるように伝子 changed 変したマウスを用いた. The two pieces of each of the two pieces of the joint type and the same abdominal joint type are fixed by perfusion and taken out. After that, the applicant Dr. Graham Knott developed the light-electron microscopy correlation method (MacLachlan et al., 2018) and performed the research. The optical microscope is used to print images of blood vessels and cells using a microscope.さらに、荍光LOGOされたシナプス前Terminal confocal micromirror をGet した.その后, Institute of Physiology, において, スライスをelectronic microscopy observation, に staining, resin embedding を行った. SBF-SEM observation is carried out, the location of blood vessels and cell body is printed, the field of 30 nm optical micromirror image is obtained beforehand, and the 30 nm electronic micromirror image is obtained.その Result, Cell release を Suppression したマウスでは, シナプスTerminal form がAbnormal になることが分かった.