感覚運動統合を制御する大脳皮質-高次視床核路の分子発生機構

控制感觉运动整合的大脑皮层-丘脑上核束的分子发育机制

• 批准号: 22K06242
• 负责人: 林 周一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06242/
• 关键词: 海馬; シナプス終末; 小胞放出; SBF-SEM; 大脳皮質; 視床

海馬における神経回路のシナプス形成の分子制御機構を明らかにするために、まず、子宮内電気穿孔法を用いて海馬のCA3領域に蛍光タンパク質を導入し、シナプス終末の形態を解析した。その結果、軸索で小胞放出を抑制したマウスでは、シナプス前終末と後終末の形態形成が阻害されることが分かった。このことは、シナプス前終末からの小胞放出がシナプス後終末の形態形成にも重要であることを示唆する。次に、蛍光顕微鏡で観察された形態異常の詳細を明らかにするために、Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM)を用いて、シナプス終末の3次元微細形態解析を行った。材料は上記と同様に、シナプス前終末からの小胞放出を抑制し、同時にその軸索を蛍光タンパク質で標識されるように遺伝子改変したマウスを用いた。成獣のホモ接合型と同腹のヘテロ接合型の各２匹を灌流固定し、取り出した脳をスライスした。その後、申請者がスイスのGraham Knott博士らと開発した光－電子顕微鏡相関法（MacLachlan et al., 2018）による観察を行った。まず、光学顕微鏡を用いて目印となる血管や細胞を撮影した。さらに、蛍光標識されたシナプス前終末の共焦点顕微鏡像を取得した。その後、生理学研究所において、スライスを電子顕微鏡観察用に染色し、樹脂包埋を行った。SBF-SEM観察では、血管や細胞体の位置を目印にして、事前に取得した蛍光顕微鏡像の領域を探し、30 nmごとの連続電子顕微鏡画像を取得した。その結果、小胞放出を抑制したマウスでは、シナプス終末形態が異常になることが分かった。

The molecular control mechanism of hippocampus neurocircuit formation was analyzed by means of intrauterine electroporation in CA3 domain of hippocampus. As a result, axonal cell release is inhibited, and morphology is inhibited. This is the first time that a cell is released from a cell. The detailed morphological abnormalities detected by secondary and optical microscopy were analyzed by Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM). In addition, it is necessary to improve the quality of the materials before they are released. 2 pairs of each of the two types of fusion were perfused and fixed. After the announcement, the applicant, Dr. Graham Knott, developed the related method of opto-electronic micromirrors (MacLachlan et al., 2018). The blood vessel cells were imaged by optical microscopy. In addition, the confocal micro-mirror image of the front end of the light mark is obtained. The Institute of Physiology, the Institute of Chemistry, the Institute of Chemistry, the Institute of Chemistry SBF-SEM observation of the position of blood vessels and cell bodies, in advance to obtain light micro-mirror images of the field, 30 nm and even electronic micro-mirror images The results of cell release are abnormal.