プロテオミクスによる成長円錐からシナプス終末への分子過程の解明

使用蛋白质组学阐明从生长锥到突触末端的分子过程

• 批准号: 15029218
• 负责人: 五十嵐 道弘
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029218/
• 关键词: プロテオミクス; 成長円錐; 微小管; 表面プラズモン共鳴; SCG10; リン酸化; シンタキシン; ミオシンV; アクチン調節蛋白質

2年目の本年度は、以下の研究を行った。1)プロテオミクスに基づき、成長円錐に特異的な微小管脱重合蛋白質SCG10が成長円錐に濃縮されていることを確認した。特にそのリン酸化がすべて同様の役割を果たすのか、否かを検討し、S50はリン酸化されても従来の説のように、微小管脱重合能を失わないことを証明した。またtubulin結合能をプラズモン共鳴法を用いて、正確に定量解析することにより、リン酸化は結合の親和性には影響せず、その結合速度を変化させることが可能であることを見出した。2)成長円錐および成長円錐膜において同定された900種類の蛋白質を分類し、免疫組織化学を行うもの、蛋白質間相互作用を解析するもの、siRNAを行うもの、等に分けた。一部は、免疫細胞化学を行って、成長円錐への濃縮程度に関するインデックスを作成した。3)成長円錐に特異的な膜結合蛋白質のひとつである、糖蛋白質M6aの結合蛋白質を10種類ほど同定した。これらのうち、特に相互作用が興味深い2種類の機能未知の蛋白質についてさらに詳細に検討した。またこのプローブが細胞内で糖鎖付加の際に細胞内の蛋白質と相互作用しやすいため、現在、糖鎖のない状態での相互作用の解析法を検討した。4)膜蛋白質で神経の成長に深く関与することをわれわれが数年前に証明したシンタキシンは成長円錐に濃縮されていることがわかった。成長円錐の挙動に関係する0.1-1μMのカルシウムで変化する相互作用として、小胞輸送モーターであるミオシンVとの結合を見出し、詳細に解析した。

For the current year of the second year, を and the following を research fields った. 1) プ ロ テ オ ミ ク ス に base づ き, growth has drifted back towards &yen; tiny tube cone に specific な overlap protein off SCG10 が growth has drifted back towards &yen; cone に enrichment さ れ て い る こ と を confirm し た. Special に そ の リ ン acidification が す べ て with others の "を cut fruit た す の か, no か を beg し 検, S50 は リ ン acidification さ れ て も 従 の said の よ う に, tiny tubes can overlap を lost わ な い こ と を prove し た. ま た tubulin binding energy を プ ラ ズ モ を ン resonance method with い て, correct に quantitative analytic す る こ と に よ り, リ ン acidification は combining の affinity に は influence せ ず, そ を の combining speed variations change さ せ る こ と が may で あ る こ と を shows し た. 2) growth has drifted back towards &yen; cone お よ び growth has drifted back towards &yen; cone membrane に お い て with fixed さ れ た 900 kinds の protein を classification し, immunohistochemical を line う も の, protein interaction between を parsing す る も の, siRNA を line う も の, に points such as け た. A section of た, immunocytochemistry を line って, long cone へ <s:1> concentration degree に related する <s:1> デッ デッ デッ スを スを スを is made into た. 3) growth has drifted back towards &yen; cone に specific な membrane bound proteins の ひ と つ で あ る, sugar, protein M6a の binding protein を 10 kinds ほ ど be し た. Youdaoplaceholder6 れら うち うち, special に interaction が is of great interest れら 2 types <s:1> function unknown <s:1> protein に に てさらに てさらに detailed に検 discussion on た. ま た こ の プ ロ ー ブ が で sugar locks plus の interstate に と の protein interaction in the cell し や す い た め, now, sugar, lock の な い state で の interaction の analytic method を beg し 検 た. 4) membrane protein で god 経 の growth に deep く masato and す る こ と を わ れ わ れ が に years ago proved し た シ ン タ キ シ ン は growth has drifted back towards &yen; cone に enrichment さ れ て い る こ と が わ か っ た. Growth has drifted back towards &yen; の cone 挙 dynamic に masato is す る 0.1 1 mu M の カ ル シ ウ ム で variations change す る interaction と し て, vesicular transport モ ー タ ー で あ る ミ オ シ ン V と の combining を see し, detailed analytical し に た.

项目成果

Watanabe, M., Igarashi, M.: "Ca^<2+>-dependent interactions of syntaxin and myosin-V"Mol Cell Biol. 14(Suppl.). 234a-234a (2003)

Watanabe，M.，Igarashi，M.：“突触蛋白和肌球蛋白-V 的 Ca^2 依赖性相互作用”Mol Cell Biol。

Inhibitory Effect of the Small Heterodimer Partner on Hepatocyte Nuclear Factor-4 Mediates Bile Acid-induced Repression of the Human Angiotensinogen Gene*

• DOI: 10.1074/jbc.m310577200
• 发表时间: 2004-02
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yoko Shimamoto;J. Ishida;K. Yamagata;Tomoko Saito;Hideki Kato;Toshiki Matsuoka;K. Hirota;H. Daitoku;M. Nangaku;K. Yamagata;H. Fujii;J. Takeda;A. Fukamizu

五十嵐 道弘: "中枢シナプスの形成機構"蛋白質核酸酵素. 49(3). 263-269 (2004)

Michihiro Igarashi：“中央突触形成机制”蛋白质核酸酶49（3）（2004）。

Urinary excretion of fatty acid-binding protein reflects stress overload on the proximal tubules

• DOI: 10.1016/s0002-9440(10)63384-6
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY
• 影响因子: 6
• 作者: Kamijo, A;Sugaya, T;Kimura, K
• 通讯作者: Kimura, K

Glia-derived inhibitors of axonal regrowth

神经胶质细胞衍生的轴突再生抑制剂

• 发表时间: 2005
• 期刊: Acta Medica Biologica (印刷中)
• 作者: Igarashi M;Sato M
• 通讯作者: Sato M