βグルカンの構造多様性を受容するDectin-1受容体の分子メカニズムの解明

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Dectin-1レクチンドメインの安定大量精製に関しては、調製プロトコールの最適化およびタグの切除を行い、各種実験に利用することが可能となった。質量分析では、Dectin-1および水溶性βグルカンの単体と、これらの複合体の分子量を計測した。それにより、化学量論比およびタンパク質に結合したβグルカンの分子種の同定を目指した。Dectin-1の単体の測定では、理論値と測定値がほぼ同一の値となった。また、水溶性βグルカン単体の測定では、様々な重合度の水溶性βグルカンの存在が確認できた。Dectin-1と水溶性βグルカンの複合体の測定では、主に存在するのが水溶性βグルカンとDectin-1それぞれの単量体ではあったが、Dectin-1の4量体と水溶性βグルカンとの複合体ピークを確認することができた。また、走査型プローブ顕微鏡での観察では、Dectin-1とβグルカンとの複合体形成において、多量体化の時間変化を視覚的に観察することが可能となった。これらの結果からは、混合初期は１個のDectin-1が結合・解離を繰り返していたが、時間の経過とともに複数個のDectin-1が結合し、βグルカンからあまり解離しない結果が得られた。このことから、複数個のDectin-1が結合することで複合体が安定化されうることが判明した。さらに、様々な不溶性βグルカンを用いて、Dectin-1のβグルカン結合の構造特異性を明らかにするため、精密ろ過膜を用いた結合実験を行った。その結果、Dectin-1と不溶性βグルカンの結合親和性は、βグルカンの分岐頻度のみならずその集合様式によっても影響を受けると考察した。