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糸状菌の細胞表層動態を可視化する～新しい薬剤標的スクリーニング系の開発に向けて～

丝状真菌细胞表面动态可视化〜致力于开发新的药物靶标筛选系统〜

基本信息

批准号：
22K06600
负责人：
田中大
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tohoku Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

令和４年度は、オーキシンデグロンシステムを利用したプロテインノックダウン実験系をAspergillus fumigatus に実装するための、技術基盤整備に着手した。特に、オーキシンデグロンの主要構成要素である OsTIR1 遺伝子を Aspergillus 属の恒常発現プロモーター PkpiA や誘導発現プロモーター PglaAの下流で制御するように発現ベクターを組換えつつ、OsTIR1 タンパク質をコードする塩基配列のコドン最適化を検討することで、Aspergillus 属真菌における TIR1 タンパク質発現レベルの改善に成功した。同時並行で、本菌のプロテインノックダウンのよりよい遺伝子標的を探す目的で、細胞壁ガラクトマンナン生合成にかかわる遺伝子を探していたところ、それぞれ独立にガラクトマンナン生合成を担う Mnt1、AnpAを同定し、査読付き英語論文誌にて報告した (Kadooka et al., Glycobiology, 2023; Kadooka et al., mSphere, 2023)。Mnt1は糖タンパク質型ガラクトマンナン、AnpAは糸状菌型コアマンナンの生合成に寄与していた。anpA遺伝子欠損株では、既知の cmsA 遺伝子欠損株と同じレベルでコアマンナン構造が高度に破壊されるが、cmsA遺伝子欠損株で見られるような高度の菌糸生育異常は観察されない。このことは、コアマンナン構造の破壊と糸状菌型生育が必ずしも相関しないことを示唆する。プロテインノックダウンの標的としてAnpAを試してみることで、コアマンナン構造と菌糸型生育の相関関係をより深く理解することができるだろう。

And 4 year は, オーキシンデグロンシステムを using したプロテインノックダウン be 験 department を Aspergillus fumigatus に be loaded するための gearing up, technology base plate に to した. に, オーキシンデグロンの main components である OsTIR1 posthumous son 伝を Aspergillus genus の constant 発 now プロモーター PkpiA や induced 発 now プロモーター PglaA の obscene で suppression するように発 now ベクターを group in えつつ, OsTIR1 タンパク qualitative をコードする salt base with column のコドン optimization を beg す検ることで, Aspergillus fungus における TIR1 タンパク qualitative 発 now レベルの improve に successful した. で in parallel, the bacteria のプロテインノックダウンのよりよい heritage 伝 son mark を agent です purpose, cell wall ガラクトマンナン biosynthesis にかかわる posthumous son 伝を agent していたところ, それぞれ independent にガラクトマンナン biosynthesis を bear う Mnt1, AnpA を with し, check 読 pay tzu き English thesis にて report した (Kadooka et al. Glycobiology, 2023; Kadooka et al. mSphere, 2023). Mnt1 は sugar タンパク mass type ガラクトマンナン, AnpA は si form bacteria コアマンナンの biosynthesis に send していた. AnpA heritage 伝 son owe damage strain では, both known の cmsA heritage 伝 son owe と damage strain with じレベルでコアマンナン tectonic が highly に broken 壊されるが, cmsA but 伝 son owe damage strain で see られるような highly の bacteria si fertility abnormal は観 examine されない. このことは, コアマンナン tectonic の broken 壊と si form bacteria will birth がずしも phase masato しないことを in stopping する. プロテインノックダウンの mark として AnpA を try してみることで, コアマンナン tectonic と bacteria si type fertility の phase masato masato is をより deeper understanding すくることができるだろう.