Development of new therapeutic strategy against renal interstitial fibrosis utilizing mTOR inhibitor

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本研究では、腎移植患者及び肝移植患者双方における低用量CNIとエベロリムスの併用を念頭に、CNIによる腎病変の分子機構解明と並行してエベロリムスによる腎間質の線維化抑制の分子機構解明を目的とした。当初予定していた通り、ラットを用いたin vivo動物実験系ならびにラット腎由来培養細胞（NRK52［上皮細胞］、NRK49F［線維芽細胞］）を用いた系統的な検討を進め、腎間質の線維化に起因する慢性腎臓病の増悪とmTOR阻害薬の使用による治療効果の過程において、HE4の発現がどのように関連し、どのような役割を示すのかについて解析を進めている。（１）in vivo動物実験系：すでに確立された慢性腎不全モデルラット（5/6腎摘出ラット）を用い、タクロリムスにエベロリムスを併用して、人感室の加速度的な進行とエベロリムス 併用による線維化の抑制効果、すなわち腎保護効果の評価を行っている。病変進展に及ぼすタクロリムスの影響（病変の重篤化等）ならびにエベロリムスの影響について、腎間質の線維化マーカーαSMA（alpha-smooth muscle cell actin）の変化、外因的に投与した蛍光標識アルブミンの再吸収能等を指標として調べている。なお、エベロリムスの効果については活性化（リン酸化）mTORの基質であるS6キナーゼのリン酸化を指標として定量数値化する予定である。（２）in vitro培養細胞系：ラット腎間質線維芽細胞由来培養細胞NRK49Fを用いて、TGFb刺激による筋線維芽細胞への形質転換過程と活性化、筋線維芽細胞におけるαSMAの産生と消失に及ぼすエベロリムス、タクロリムスの影響を調べる予定である。並行して、ラット腎近位尿細管由来培養細胞NRF52に及ぼす両薬物の影響（特に細胞毒性、解毒反応に及ぼす影響）について、細胞内受容体FKBP1A（FK506 binding protein 12kDa, 別名FKBP12）との複合体形成を中心に調べ、in vivo動物実験の分子レベルでの再現と評価を行うことを想定している。