Mechanistic study of sulfa drug-induced severe cutaneous adverse reactions by focusing on HLA-A*11:01

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本研究は、サルファ剤の使用によって引き起こされる日本人のStevens-Johnson症候群／中毒性表皮壊死症、薬剤過敏症症候群等の重症薬疹に、HLA-A*11:01が有意（オッズ比9.84）に関連していることを世界で初めて発見した申請者らの独自の成果に立脚し、同HLAを中心にサルファ剤による重症薬疹が発症するメカニズムを分子病態学的に解明しようとするものである。今年度は、各種のHLA-A3 supertype（HLA-A*11:01、A*03:01、A*31:01、A*33:01）を発現するB細胞株等を用い、サルファ剤（スルファメトキサゾール；SMX等）や各種代謝物（SMXニトロソ体、N-ヒロドキシ体等）および陰性対照を暴露した際の、小胞体ストレス分子（BiP、sXBP-1等）の発現や、細胞表面へのHLA分子の発現およびそのコンフォメーション、細胞生存率へ与える影響等を解析した。HLA発現は、汎HLA特異的抗体の他、変性したHLA-Aに優先的に結合する抗体や、HLA-A11特異的抗体等を用い、フローサイトメトリーにより測定した他、蛍光顕微鏡を用いて細胞膜表面への発現量を調べた。また、逆転写PCR、リアルタイムPCR、ウェスタンブロッティング、免疫沈降法により、mRNAの発現やタンパク質の発現と分子量、糖鎖修飾の有無、さらにβ2マイクログロブリンとの結合性を調べた。さらに、細胞生存率への影響については、テトラゾリウム塩を用いる比色法、ルシフェラーゼを用いる発光法、電気抵抗の経時変化を用いるラベルフリー法を用いた。一部のHLAで細胞表面への発現量およびそのコンフォメーションの異常が認められたが、概ねサルファ剤への暴露は明瞭な小胞体ストレスを誘導することはなく、細胞生存率への影響も僅かであった。次年度は、HLA-A*11:01を発現する肝細胞を樹立して解析を進める。