Mechanistic study of sulfa drug-induced severe cutaneous adverse reactions by focusing on HLA-A*11:01

以HLA-A*为重点的磺胺类药物致严重皮肤不良反应机制研究11:01

• 批准号: 22K06738
• 负责人: 中村 亮介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06738/
• 关键词: 重症薬疹; サルファ剤; HLA-A*11:01

本研究は、サルファ剤の使用によって引き起こされる日本人のStevens-Johnson症候群／中毒性表皮壊死症、薬剤過敏症症候群等の重症薬疹に、HLA-A*11:01が有意（オッズ比9.84）に関連していることを世界で初めて発見した申請者らの独自の成果に立脚し、同HLAを中心にサルファ剤による重症薬疹が発症するメカニズムを分子病態学的に解明しようとするものである。今年度は、各種のHLA-A3 supertype（HLA-A*11:01、A*03:01、A*31:01、A*33:01）を発現するB細胞株等を用い、サルファ剤（スルファメトキサゾール；SMX等）や各種代謝物（SMXニトロソ体、N-ヒロドキシ体等）および陰性対照を暴露した際の、小胞体ストレス分子（BiP、sXBP-1等）の発現や、細胞表面へのHLA分子の発現およびそのコンフォメーション、細胞生存率へ与える影響等を解析した。HLA発現は、汎HLA特異的抗体の他、変性したHLA-Aに優先的に結合する抗体や、HLA-A11特異的抗体等を用い、フローサイトメトリーにより測定した他、蛍光顕微鏡を用いて細胞膜表面への発現量を調べた。また、逆転写PCR、リアルタイムPCR、ウェスタンブロッティング、免疫沈降法により、mRNAの発現やタンパク質の発現と分子量、糖鎖修飾の有無、さらにβ2マイクログロブリンとの結合性を調べた。さらに、細胞生存率への影響については、テトラゾリウム塩を用いる比色法、ルシフェラーゼを用いる発光法、電気抵抗の経時変化を用いるラベルフリー法を用いた。一部のHLAで細胞表面への発現量およびそのコンフォメーションの異常が認められたが、概ねサルファ剤への暴露は明瞭な小胞体ストレスを誘導することはなく、細胞生存率への影響も僅かであった。次年度は、HLA-A*11:01を発現する肝細胞を樹立して解析を進める。

This study is aimed at clarifying the molecular pathologies of Stevens-Johnson syndrome, toxic epidermal death, drug allergy syndrome, and other severe drug disorders in Japanese patients with HLA-A*11:01 intentionally (ratio 9.84). This year, various HLA-A3 supertypes (HLA-A*11:01, A*03:01, A*31:01, A*33:01) have been developed in B cell lines, etc., and the effects of various metabolites (SMX, N-terminal, etc.) on cell survival have been analyzed. HLA discovery is based on the determination of the presence of HLA-specific antibodies and HLA-A11-specific antibodies, and the use of light microscopy to modulate the amount of HLA-specific antibodies detected on cell membranes. PCR, reverse transcription PCR, DNA sequencing, immunoprecipitation, mRNA production, protein development, molecular weight, presence or absence of glycan modification, and β2-DNA sequencing and binding. In addition, the influence of cell survival rate on cell survival rate was studied by colorimetry, light emission method, and time change of electrical resistance method. Some HLA cell surface abnormalities are identified by cell surface exposure and cell survival. The next year, HLA-A*11:01 was detected and analyzed in hepatocytes.

项目成果

日本人におけるスルホンアミド系薬剤による重症薬疹の発症とHLA-A*11:01の関連

日本人HLA-A*11:01与磺胺类药物引起的重症药疹发病的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: R Nakamura;N Arakawa;Y Tanaka;N Uchiyama;A Sekine;Y Mashimo;K Tsuji;T Kagawa;K Sato;M Watanabe;M Aiso;Y Hiasa;Y Takei;H Ohira;M Ayada;E Tsukagoshi;K Maekawa;M Tohkin;Y Saito;H Takikawa;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸
• 通讯作者: 中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸

日本人におけるサルファ剤による重症薬疹の発症とHLA-A*11:01の関連

日本人HLA-A*11:01与磺胺类药物严重药疹发病的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: R Nakamura;N Arakawa;Y Tanaka;N Uchiyama;A Sekine;Y Mashimo;K Tsuji;T Kagawa;K Sato;M Watanabe;M Aiso;Y Hiasa;Y Takei;H Ohira;M Ayada;E Tsukagoshi;K Maekawa;M Tohkin;Y Saito;H Takikawa;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸;中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸
• 通讯作者: 中村亮介，大関健志，平山令明，関根章博，水川良子，塩原哲夫，渡辺秀晃，末木博彦，小川浩平，浅田秀夫，塚越絵里，松永佳世子，新原寛之，山口由衣，相原道子，莚田泰誠，斎藤嘉朗，森田栄伸