ゼブラフィッシュ胚心臓における刺激伝導系細胞の可視化とその発生過程の発現情報収集

点击翻译按钮获取中文摘要

心臓の発生・分化における刺激伝導系の細胞系譜とその運命決定のメカニズムはいまだ不明である。ゼブラフィッシュは、遺伝子操作が容易であり、胚が透明であることから、生きたまま臓器の観察が容易に行える。これらは、細胞系譜の追跡や細胞レベルでの発現遺伝子の解析を空間的、また経時的に解析するのに適している。そこで本研究では、刺激伝導系細胞の成り立ちを分子の言葉で理解するため、ゼブラフィッシュを用いて心臓発生過程の遺伝子発現アトラスを作成し、その成り立ちを網羅的に解析することを試みている。魚類の刺激伝導系の存在は不明であったが、私たちはゼブラフィッシュの成魚心臓領域に刺激伝導系マーカー（HCN4）陽性細胞が存在することを見出した。本年度は、成体の心臓におけるHCN4抗体陽性細胞の局在を詳細に調べた。ゼブラフィッシュ心臓を未固定で凍結した後、連続凍結切片を作成し、HCN4抗体を用いて蛍光免疫組織化学法を行った。その結果、心臓から静脈洞の領域に存在する弁様構造の内部に強い陽性反応が見られた。この領域には内皮細胞、心筋細胞、心外膜が存在する。そこでHCN4陽性細胞がどの領域に存在するのかを明らかにするため、心筋細胞のマーカーとしてα-actinin抗体を用いて心筋細胞の位置を明らかにし、HCN4抗体陽性細胞の局在と比較した。その結果、HCN4陽性細胞は心筋細胞と一部重なって局在することが明らかになった。このことは、ゼブラフィッシュ刺激伝導系細胞が静脈洞に近い心房領域の心筋領域に存在する可能性を示している。