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Analysis of the action mechanism of cytoadherence inhibiting antibodies to Mycoplasma pneumoniae and application to vaccine antigen design.

肺炎支原体细胞粘附抑制抗体作用机制分析及其在疫苗抗原设计中的应用

基本信息

批准号：
22K07063
负责人：
見理剛
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

M. pneumoniae の細胞接着を強く阻害する抗P1モノクローナル抗体（P1-MC4）は、P1タンパク質のC末端側を抗原として作製された。このP1-MC4が認識するエピトープを特定するため、P1タンパク質のC末側を連続的に断片化したペプチドを準備し、P1-MC4との反応性を調べた。その結果、P1-MC4が認識するのはP1の13アミノ酸残基T1426-D1438（TDLFDPVTMLVYD）であることがわかった。P1の結晶構造では、この配列はC末ドメインの中にあるループ構造にあたる。この部位は、P1とP40/P90 が2分子ずつで形成する細胞接着タンパク質複合体 (Nap) では、複合体の内側になると考えられる。Napが閉じた構造の時は抗体はエピトープにアクセスできないと考えられる。この部位に抗体がアクセスし、細胞接着阻害活性を発揮するのはNapが機能する際に動的な構造変化を起こし開いた構造をとっている可能性が考えられる。これは M. pneumoniaeの細胞接着性や滑走運動のメカニズムを考える上で有用な情報であり、P1-MC4とP1の結合状態の詳細な解析が望まれる。今後、P1-MC4と P1が結合した状態の構造解析を行うため、前段階として、P1-MC4のアミノ酸配列分析を行った。P1-MC4を生産するハイブリドーマからmRNAを抽出し、cDNAの塩基配列を分析した。その結果、ハイブリドーマからは1本の抗体H鎖と 2本の L鎖のmRNAが検出された。P1-MC4は2種のL鎖が混合したモノクローナル抗体であったことがわかった。このH鎖と2本の L鎖の配列はAccession No.LC600310、LC600311、LC600312でデータベースに登録した。P1-MC4 は、L鎖が2種類含まれているため、Fab断片の結晶化による構造解析は困難であると予想された。

M. P1-MC4 is an anti-P1 antibody that strongly inhibits the cellular immunity of pneumonias. P1-MC4 is an anti-P1 antibody that acts on the C-terminal side of the P1 protein. The P1-MC4 is known to be specific, and the P1-MC4 is responsive to the fragmentation of the end of the C. The results showed that P1-MC4 residues were identified in P1 - 13 amino acid residues T1426-D1438 (TDLFDPVTMLVYD). The crystal structure of P1 is opposite to that of P1. The two molecules P1 and P40/P90 form a cellular complex (Nap), which is located inside the complex. Nap close to the structure of the time when the antibody is not open to the public The possibility of structural changes in the development of cellular protective activity due to the presence of antibodies in these sites is examined.これは M. A detailed analysis of the binding state of P1-MC4 and P1 is required. In the future, P1-MC4 and P1 are combined and structural analysis is carried out. In the previous stage, P1-MC4 is combined with acid alignment analysis. P1-MC4 gene expression was detected by PCR and cDNA sequencing. The result is that the mRNA of the first antibody and the second antibody are detected. P1-MC4 is a hybrid of two kinds of L locks. The H lock and the L lock are assigned to Accession No. LC600310, LC600311, LC600312. P1-MC4, L-lock, two kinds of crystals, structural analysis of Fab fragments, structural analysis of Fab fragments, structural analysis of Fab fragments.