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ゲノム情報にもとづくM.Pneumoniaeの細胞構造の理解と病原性の解明

基于基因组信息了解肺炎支原体的细胞结构和致病性

基本信息

批准号：
20018029
负责人：
見理剛
金额：
$ 4.99万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

M.pneumoniae M129株の全遺伝子ORF産物の網羅的局在観察は689個のうち633個(92%)について終了した。大部分のORF産物は蛍光タグ(EYFP)をN末端に連結した形で局在観察をおこなった。このうち蛍光顕微鏡でEYFPの蛍光が観察されたのは494個(72%)で、残り195個(28%)は蛍光が観察されなかった。蛍光が観察されたもののうち、43%は蛍光シグナルが細胞内各所にほぼ局在して観察された。また23%は細胞全体に蛍光が広がって観察された。残りの34%は蛍光シグナルの局在と拡散が混在していて不規則な像を示した。これらの中から、蛍光の局在パターンの再現性がよく、詳しい解析対象にするものを58個選び出した。このうち9個は、以前から接着器官の構成成分と考えられてきたタンパク質だった。それ以外は、10個が核酸・タンパク質合成にかかわるタンパク質、20個は各種酵素タンパク質のホモログ、2個は分子シャペロン、15個は機能未知のタンパク質だった。これらのORF産物について電子顕微鏡による高解像度な局在分析を行った。電顕での局在観察は、EYFPタグを金コロイド抗体で標識し、免疫電顕法で行った。0.1%のTriton X-100でおだやかにM.pneumoniaeを処理することで細胞内を露出させ、細胞骨格構造に局在するORF産物に金コロイド抗体がアクセスできるようにした。この観察で機能未知のタンパク質の中から1つ、細胞骨格構造のRod部分に明らかに局在して観察されるものが見つかった。また、電顕を用いて細胞骨格関連分子の形態を観察する試みは、P1アドヘシンタンパクとP90タンパク質の複合体を対象にして行った。精製したP1-P90タンパク質複合体をロータリーシャドウイング法で観察した結果、これらのタンパク質複合体は直径約20nmの球状の分子として観察された。

689 ORF products (92%) of M.pneumoniae strain M129 were detected. Most ORF products are N-terminal linked in the form of EYFP. 494 (72%) and 195 (28%) of the EYFP were detected by micromirrors. 43% of the cells were exposed to light. Another 23% were observed in the entire cell. 34% of the residual light is mixed with irregular light. The reproducibility of the image in the middle of the picture is very high, and the resolution of the image in the middle of the picture is very high. The composition of the nine organs was examined. There were 10 nucleic acids, 20 enzymes, 2 molecules and 15 genes whose functions were unknown. The ORF product is detected by electron microscope and analyzed with high resolution. EYFP is a new type of antibody that can be detected by electroporation. 0.1% of Triton X-100 can be used to treat M.pneumoniae, which can be exposed in cells and cells, and can be used to treat ORF products. The function of this observation is unknown, and the quality of the cell is unknown. The structure of the Rod is obvious. P1-P90-P90 The P1-P90 complex is a spherical molecule about 20nm in diameter.

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

うごめく細菌マイコプラズマのユニークな運動メカニズム

移动细菌支原体独特的移动机制

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
現代化学 5
影响因子：
0
作者：
宮田真人;中根大介;宮田真人
通讯作者：
宮田真人

実験室の厄介者, マイコプラズマのひみつ-モータータンパク質も細胞骨格も使わない細胞運動-

实验室里的麻烦事支原体的秘密 -不使用运动蛋白或细胞骨架的细胞运动-

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
生化学 81
影响因子：
0
作者：
Kawano;M.;Inoue;T.;Tsukamoto;H.;Takaya;T.;Enomoto;T.;Takahashi;R. U.;Yokoyama;N.;Yamamoto;N.;Nakanishi;A.;Imai;T.;Wada;T.;Kataoka;K. and Handa;H;宮田真人
通讯作者：
宮田真人

Regions on Gli349 and Gli521 protein molecules directly involved in movements of Mycoplasma mobile gliding machinery suggested by inhibitory antibodies and mutants.

抑制性抗体和突变体表明，Gli349 和 Gli521 蛋白分子上的区域直接参与支原体移动滑行机器的运动。