Fork Reversal因子POLD4を指標とした新規肺癌分子標的治療法の開発

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肺癌は年間死亡者数が癌腫中で第一位であり、発癌過程の解明、予防、治療法の開発が強く望まれている。これまでに申請者らは臨床検体と培養細胞双方から肺癌の組織型特徴的な遺伝子発現プロファイルに注目し、新規発癌メカニズムの提唱や分子標的候補の提案を行ってきた。この過程で従来DNA複製因子として報告されていたDNAポリメラーゼδ複合体サブユニットPOLD4、がFork Reversal開始機能を有する可能性を明らかにした。本研究では新規Fork Reversal開始因子POLD4の癌病理における分子機構を明らかにし、この経路を標的とした新たな肺癌治療法の開発を目指す。本年度は、細胞生物学な実験として、主にDNAファイバー法を用いた解析と各種抗癌剤の至適条件検討を行った。DNAファイバー法を用いた解析では、既に報告のあるFork Reversal開始因子のノックダウンをA549細胞及びPOLD4ノックアウト（KO）A549細胞に対して行い、Fork Reversal活性を調べることでPOLD4がこの経路において機能的相互作用を持つ因子の同定を試みた。各種抗癌剤の至適条件の検討においては、コロニーフォーメーションアッセイを行って、POLD4発現量依存的に感受性が変化する薬剤やその組み合わせの同定を行った。また、PDXマウスモデルを用いた検証については、予備実験としてin situ RNAハイブリダイゼーションによる肺癌臨床検体のPOLD4発現量の測定を試みた。CDXマウスモデルを用いた解析については、研究分担者・竹内博士の協力の下、A549細胞及びA549 POLD4 KO細胞の皮下注射による腫瘍形成能の確認を行った。