ヒト膵管上皮オルガノイドを用いた膵管内乳頭粘液性腫瘍の発癌関連因子探索研究

利用人胰腺导管上皮类器官研究导管内乳头状粘液性肿瘤的癌变相关因素

基本信息

  • 批准号:
    22K07271
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.75万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2025-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

本研究は、ヒト膵切除検体から作成した膵管上皮organoidにIPMNを特徴づける任意の遺伝子変異を導入した際の形質変化を反映した液性因子を解明する事を目的としている。任意のcDNA配列を組み込んだplasmid DNAを作成し、Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G、Takara Bio)を用いてLenti virus vectorを作成した。KRASG12Dは既存のplasmidであるpBABE-Puro-KRas*G12Vを、GNASR201Hは、TrueORF cDNA Clone(OriGne)で作成したplasmidを用いた。7日~14日間培養したorganoidを回収しsingle cell化し、Matrigel(Corning)にsingle cellと作成したベクターを添加しtransfectionを行っているが、KRASG12Dについては安定した遺伝子導入が可能であった。
The purpose of this study is to create a vascular organoid that characterizes IPMN, and to introduce a genetic variant that reflects its morphological characteristics. Any cDNA sequence is composed of plasmid DNA, Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G, Takara Bio) and Lenti virus vector. KRASG12D is an existing plasmid. pBABE-Puro-KRas*G12V, GNASR201H, TrueORF cDNA Clone (OriGne) are used. 7 ~14 Day culture: organoid, single cell, Matrigel(Corning), single cell, KRASG 12D, stability, and introduction of new cells.

项目成果

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