過去の細胞状態の記録による神経炎症ミクログリアの時空間的解析

通过记录过去的细胞状态对神经炎症小胶质细胞进行时空分析

• 批准号: 22K07347
• 负责人: 永田 健一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07347/
• 关键词: 神経炎症; ミクログリア; シングルセルRNA-seq; ゲノム編集; Creマウス; 神経損傷; ケモカイン

神経炎症は神経変性疾患や神経損傷に付随する免疫応答である。細胞の遺伝子発現は、炎症の惹起から収束までで大きく変化するため、特定のマーカーだけで炎症に関わる細胞の動態を追跡するのは困難である。そこで、本研究では過去に神経炎症を経験した細胞を継続的に標識できるマウスを作出し、神経炎症のプロセスを理解することを目指した。事前に実施していたシングルセルRNA-seqで同定した神経炎症マーカーCxcl10をCre挿入の標的とした。効率よく長鎖の配列をノックインするため、研究分担者である吉見一人博士が開発のCombi-CRISPR法（Hum Genet 2021 PMID: 32617796）を採用した。ジェノタイピングPCR、シークエンスによりCreの配列挿入を確認後、得られたFounderマウスを繁殖させ、Cre依存的に蛍光タンパクを継続的に発現するレポーターマウスと交配した。作製したマウスの片側舌下神経を損傷し、一定期間をおいて、脳の凍結切片を作製した。起始核である舌下神経核を観察したところ、蛍光タンパクの発現には非損傷側・損傷側間で明らかな差が認められた。炎症収束後にも、損傷側における蛍光タンパクの発現は維持されていたことから、神経炎症という過去のイベントの痕跡を組織中に保持するマウス系統が得られたと考えている。また、追加のシングルセルRNA-seqを実施するなどして、神経炎症の惹起から収束までの各ステージのマーカーを探索した。ミクログリアにおいては、炎症前、炎症時、炎症後とステージごとのユニークな分子マーカーが見つかっている。

Neurological inflammation, neurological disorders や, neurological damage に, followed by する immunity 応 answer である. Cell の heritage 伝 発 は now, inflammation の provoked か ら 収 beam ま で で big き く variations change す る た め, specific の マ ー カ ー だ け で inflammation に masato わ る cells の dynamic を tracing す る の は difficult で あ る. そ こ で, this study で は past に god 経 inflammation を 経 験 し た cells を 継 続 に logo で き る マ ウ ス を し, god 経 inflammation の プ ロ セ ス を understand す る こ と を refers し た. Advance に be applied し て い た シ ン グ ル セ ル RNA - seq で with fixed し た god 経 inflammation マ ー カ ー Cxcl10 を Cre scions into の mark と し た. The efficacy is よく. Long-locking <s:1> configuration is をノッ. Youdaoplaceholder1. Youdaoplaceholder1. Youdaoplaceholder2. Research co-author: である. Dr. Yoshimi が. Developed Combi-CRISPR method (Hum Genet 2021, PMID: 32617796). Youdaoplaceholder5. Used: た. ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ PCR, シ ー ク エ ン ス に よ り Cre の match column scions into を confirmed, is ら れ た founders マ ウ ス を breeding さ せ, Cre dependent に 蛍 light タ ン パ ク を 継 続 of に 発 now す る レ ポ ー タ ー マ ウ ス と mating し た. Preparation of <s:1> た ウス ウス ウス fragment of lateral sublingual Shinto を injury <s:1>, a certain period of をお 脳 て て, 脳 <s:1> frozen section を preparation of た. Starting nuclear で あ る tongue rather 経 nuclear を 観 examine し た と こ ろ 蛍 light タ ン パ ク の 発 now に は between the damage side, the side で Ming ら か な poor が recognize め ら れ た. After inflammation 収 beam に も, damage side に お け る 蛍 light タ ン パ ク の 発 は now maintain さ れ て い た こ と か ら, god 経 inflammation と い う past の イ ベ ン ト の trace を organization に keep す る マ ウ ス system was が ら れ た と exam え て い る. ま た, additional の シ ン グ ル セ ル RNA - seq を be applied す る な ど し て, god 経 inflammation の provoked か ら 収 beam ま で の each ス テ ー ジ の マ ー カ ー を explore し た. ミ ク ロ グ リ ア に お い て は, inflammation, inflammation, inflammation, after before と ス テ ー ジ ご と の ユ ニ ー ク な molecular マ ー カ ー が see つ か っ て い る.

项目成果

神経損傷により惹起された炎症関連細胞の時空間的解析

神经损伤引起的炎症相关细胞的时空分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 永田 健一 ;杏夕采;元岡 大祐;東 光一;黒川 顕;木山 博資
• 通讯作者: 木山 博資