神経再生関連分子DINEの機能解析

神经再生相关分子DINE的功能分析

• 批准号: 07J01394
• 负责人: 永田 健一
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01394/
• 关键词: 神経; 再生; 発生; ノックアウトマウス; プロテアーゼ

神経再生関連分子DINEの機能を明らかにするために、DINEノックアウトマウスを解析した。まず、KOの横隔膜において、シナプス形成に必須の役割を果たすMuSK、AChR、LRP4、Dok-7の発現に変化が認められるかどうか、RT-PCR法により検討した。これらの遺伝子の欠損マウスではbranchingの顕著な乱れが生じることが報告されている。しかし、コントロールマウスと比較して、これらの分子の発現に変化は認められなかった。次に、S100抗体(シュワン細胞マーカー)を用いたwhole mount免疫染色により、シュワン細胞に異常が認められるかどうかを検討した。コントロール、KOの横隔膜ともにシナプス形成部位にはS100の陽性反応が認められ、シュワン細胞が存在していることが分かった。同様の結果は、電子顕微鏡を使って、シナプスの微細構造を観察することでも確かめられた。これらの結果より、DINE欠損により生じるbranching異常は、筋細胞やシュワン細胞の極端な変化によるものではないことが示された。また、DINE抗体とNeurofilament抗体(神経マーカー)あるいは蛍光ラベルされたα-bungarotoxin(シナプス後膜マーカー)を用いて、蛍光2重染色を行い、タンパクレベルでのDINEの局在について検討を行った。胎生期の腓腹筋において、DINEとNeurofilamentの陽性反応は重なり、また、DINE陽性反応とBTX陽性反応は隣接してみられた。これらの結果から、DINEは筋内の運動神経軸索に存在し、さらに軸索終末にまで輸送されていることが明らかとなった。ノックアウトマウスの解析により得られたデータと併せて考察すると、DINEは神経細胞の軸索に存在し、何らかの機構で筋内でのbranchingを促進していると予想される。

The related molecules of Shinto regeneration, DINE <s:1> function を explanation ら にするために にするために, DINEノッ <s:1> アウト ウスを ウスを analysis た. ま ず, KO の diaphragm に お い て, シ ナ プ ス form に must cut を の service fruit た す MuSK, AChR, LRP4, Dok - 7 の 発 に now - the が recognize め ら れ る か ど う か, rt-pcr method に よ り beg し 検 た. こ れ ら の heritage 伝 の son owe loss マ ウ ス で は branching の 顕 the な disorderly れ が raw じ る こ と が report さ れ て い る. The <s:1> <s:1>, コ トロ トロ, トロ, トロ and ウスと respectively compare the に changes and <s:1> recognition of められな and められな れら molecules. に, according to antibody (シ ュ ワ ン cells マ ー カ ー) を with い た whole mount immune dyeing に よ り, シ ュ ワ ン abnormal cells に が recognize め ら れ る か ど う か を beg し 検 た. コ ン ト ロ ー ル, KO の diaphragm と も に シ ナ プ ス forming parts に は according の positive anti 応 が recognize め ら れ, シ ュ ワ が ン cells exist し て い る こ と が points か っ た. The same <s:1> result められた and the electron 顕 micromirror を make the って and シナプス microscopic structures を観 observe する, とで and とで accurately められた められた. こ れ ら の results よ り, DINE owe damage に よ り raw じ る branching unusual は, muscle cells や シ ュ ワ の extreme な ン cells - the に よ る も の で は な い こ と が shown さ れ た. ま た, DINE antibody と Neurofilament antibodies (god 経 マ ー カ ー) あ る い は 蛍 light ラ ベ ル さ れ た alpha bungarotoxin (シ ナ プ ス membrane after マ ー カ ー) を with い て, 2 line heavy staining を い 蛍 light, タ ン パ ク レ ベ ル で の DINE の bureau in に つ い て 検 line for を っ た. TaiShengQi の phil abdominal muscle に お い て, DINE と Neurofilament positive の against 応 は heavy な り, ま た, DINE positive anti 応 と BTX positive anti 応 は 隣 meet し て み ら れ た. こ れ ら の results か ら, DINE は muscle motion の god 経 axon に し, さ ら に axon terminal に ま で conveying さ れ て い る こ と が Ming ら か と な っ た. ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の parsing に よ り have ら れ た デ ー タ と and せ て investigation す る と, DINE は god 経 cells の axon に し, what ら か の institutions で tendons within で の branching を promote し て い る と to think さ れ る.

项目成果

Damage-Induced Neuronal Endopeptidase Is Critical for Presynaptic Formation of Neuromuscular Junctions

• DOI: 10.1523/jneurosci.4521-09.2010
• 发表时间: 2010-05-19
• 期刊: JOURNAL OF NEUROSCIENCE
• 影响因子: 5.3
• 作者: Nagata, Kenichi;Kiryu-Seo, Sumiko;Kiyama, Hiroshi
• 通讯作者: Kiyama, Hiroshi

Metalloprotease DINE is required for proper branching of phrenic motor axons

膈运动轴突的正确分支需要金属蛋白酶 DINE

• 发表时间: 2009
• 作者: Akitake Yamaguchi;Shigeki Matsunaga;Masakatsu Shibasaki;永田健一;永田健一
• 通讯作者: 永田健一

DINEノックアウトマウスの機能解析

DINE基因敲除小鼠的功能分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Akitake Yamaguchi;Shigeki Matsunaga;Masakatsu Shibasaki;永田健一;永田健一;永田健一;永田健一
• 通讯作者: 永田健一

DINE欠損マウスの横隔神経における運動終板形成の異常

DINE 缺陷小鼠膈神经运动终板形成异常

• 发表时间: 2009
• 作者: Akitake Yamaguchi;Shigeki Matsunaga;Masakatsu Shibasaki;永田健一;永田健一;永田健一
• 通讯作者: 永田健一