神経再生関連microRNAの探索および機能解析

神经再生相关microRNA的搜寻及功能分析

• 批准号: 22890162
• 负责人: 永田 健一
• 金额: $ 2.01万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22890162/
• 关键词: 神経; 再生; microRNA; 転写因子; in situ hybridization

microRNAは20塩基程度のnon-coding RNAであり、自らと相補性を持つ数十～数百種類のmRNAと結合して翻訳阻害や分解を引き起こす。本研究では、損傷末梢神経の再生に関与するmicroRNAを同定するため、マウス舌下神経損傷モデルを用いて種々の解析を行った。まず、TaqManアレイやreal time-PCRにより損傷後に発現変動するmicroRNAを網羅的に探索した。探索の結果、複数のmicroRNAが損傷に伴って発現変動することが分かったが、発現が低下したmiR-124に注目しさらに詳細に解析を行うことにした。miR-124は胎生期より神経系特異的に発現し、神経細胞の発生に重要であることが既に報告されている。神経損傷後1日、3日、7日、14日でin situ hybridizationを行った結果、miR-124は神経細胞に発現し、損傷後3日、7日で著しく低下すること、また14日目には若干の減少に留まることが分かった。次に検索エンジンを使ってmiR-124の標的遺伝子をin silicoで探索したところ、転写因子であるKlf6、STAT3が候補遺伝子と判定された。実際、miR-124とは反対に、Klf6、STAT3の発現が損傷後に上昇することはRT-PCR、in situ hybridizationにより確認した。さらに、神経系由来のNeuro2a細胞にmiR-124 mimicを導入すると、Klf6、STAT3ともにタンパクレベルで発現が低下し、これらはin silicoの判定結果を支持していた。以上の結果から、miR-124がキーとなる複数の転写因子の発現を調節することで、神経再生機構に関与している可能性が示唆された。

Mirnas は 20 degree of salt base の non - coding RNA で あ り, since ら と fill phase sex を hold つ dozens to hundreds of species の mRNA と combining し て turn 訳 resistance against や decomposition を lead き up こ す. This study で は, damage to peripheral god 経 の regeneration に masato and す る mirnas を with fixed す る た め, マ ウ ス tongue rather 経 damage モ デ ル を with い て kind 々 の parsing line を っ た. ま ず, TaqMan ア レ イ や real time PCR - に よ り damage after に 発 now - move す る mirnas を snare に explore し た. Explore の results and plural の mirnas に が injury with っ て 発 now - move す る こ と が points か っ た が, low 発 now が し た miR - 124 に attention し さ ら に detailed analytical line を う に こ と に し た. MiR - 124 は TaiShengQi よ り god 経 system specific に 発 し now, god 経 cell の 発 raw に important で あ る こ と が に report both さ れ て い る. God 経 injury after 1, 3, 7, 14, で the in situ hybridization を line っ た results, miR - 124 は god 経 cells に 発 し now, damage after 3, 7 で し く low す る こ と, ま た 14 orders に は several の reduce に leave ま る こ と が points か っ た. Time に 検 cable エ ン ジ ン を make っ て miR - 124 の mark heritage 伝 son を in silico で explore し た と こ ろ, planning to write factor で あ る Klf6, STAT3 が alternate heritage 伝 son と determine さ れ た. in reality, miR-124と <e:1> antithesis に, Klf6, STAT3 <s:1> showed が damage followed by に increase する と と と によ RT-PCR and in situ hybridizationによ <e:1> confirmed た た. さ ら に, god 経 origin の Neuro2a cells に miR - 124 mimic を import す る と, Klf6, STAT3 と も に タ ン パ ク レ ベ ル で 発 が し, now こ れ ら は in silico の determination results を support し て い た. の above results か ら, miR - 124 が キ ー と な る plural の planning write factor の 発 now を adjust す る こ と で, god 経 regeneration agency に masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.