高速原子間力顕微鏡を用いた凝集タンパクのクロス・シーディング効果の時空間的観察

使用高速原子力显微镜观察聚集蛋白的交叉播种效应

基本信息

批准号：
22K07514
负责人：
小野賢二郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

アルツハイマー病やレビー小体病（パーキンソン病、レビー小体型認知症）では、アミロイドβ蛋白(amyloid β-protein: Aβ)やαシヌクレイン蛋白(α-synuclein protein: αS)の単独あるいは混合で形成された凝集体が関与している可能性が示唆されている。これまでに我々は、AβあるいはαSの重合核(シード)を用いた凝集反応(セルフ・シーディング)を種々検討している。本研究では、AβとαSとの間での凝集反応(クロス・シーディング)の検討を行い、その凝集促進効果の有無や機序を明らかにすることを目的として研究を展開している。AβとαSのセルフおよびクロス・シーディングにおいて、各蛋白のシードの調整法がその凝集反応速度に影響を及ぼす可能性が考えられることから、本年度では、まず、種々の方法でAβ42およびαSのシードを調整した。なお、Aβ42は市販のものを用い、αSは大腸菌より調整し精製たものを用いた。得られた各シードを用い、チオフラビンT(thioflavin T: ThT)を利用した系でセルフ・シーディングについて種々検討した結果、調整法により凝集反応に差がみられることを明らかにした。また、Aβ42のセルフ・シーディングについて、高速原子間力顕微鏡(high-speed atomic force microscopy: HS-AFM)を利用した凝集反応の動的観察も検討しており、シードの調整法や測定条件により凝集反応が大きく影響されることを明らかにした。次に、ThTを利用した系でAβ42とαSのクロス・シーディングを種々検討したところ、現在の条件ではクロス・シーディングの凝集促進効果が小さく、HS-AFMで評価可能な時間内で動的観察が困難であることが明らかとなり、シード調整や凝集反応の条件(緩衝液や塩濃度、pHなど)最適化が必要であることが示唆された。

已经提出，淀粉样蛋白β-蛋白（Aβ）或α-突触核蛋白蛋白（αs）形成的聚集体可能与阿尔茨海默氏病和刘易体育疾病有关（帕金森氏病，Lewy Bodies的痴呆症）。迄今为止，我们使用Aβ或αs的聚合核（种子）研究了各种凝集反应（自种）。在这项研究中，我们研究了Aβ和αs之间的凝集反应（交叉播种），并正在进行研究，目的是澄清它是否对促进凝集和机制有影响。在Aβ和αs的自我和交叉种子中，调整每种蛋白质种子的方法可能会影响凝集反应速率，因此在今年，Aβ42和αs种子首先使用各种方法调整。 Aβ42是一种可商购的产品，制备αs并从大肠杆菌中纯化。使用所获得的每种种子，我们使用硫非类t（tht）研究了系统中的各种自种，发现通过调整方法观察到凝集反应的差异。此外，我们还使用高速原子力显微镜（HS-AFM）来研究了凝集反应的动态观察，以进行Aβ42的自种，并揭示了凝集反应受种子调节方法和测量条件的极大影响。接下来，在使用THT的系统中研究了Aβ42和αs的各种交叉播，并且发现在当前条件下，交叉播种的聚集促进效应很小，并且在可以用HS-AFM评估的时间段很难进行动态观察，这表明对种子调节和凝集反应的条件（例如，盐浓度，盐浓度），ph是必不可少的。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

認知症の診断と治療－アルツハイマー型認知症を中心に－

痴呆症的诊断和治疗 - 专注于阿尔茨海默型痴呆 -

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Minakawa EN;Popiel HA;Tada M;Takahashi T;Yamane H;Saitoh Y;Takahashi Y;Ozawa D;Takeda A;Takeuchi T;Okamoto Y;Yamamoto K;Suzuki M;Fujita H;Ito C;Yagihara H;Saito Y;Watase K;Adachi H;Katsuno M;Mochizuki H;Shiraki K;Sobue G;Toda T;Wad;小野賢二郎
通讯作者：
小野賢二郎

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