ALK陽性未分化大細胞リンパ腫におけるALK阻害剤耐性の機序解明と新規治療の開発

阐明 ALK 抑制剂耐药机制并开发 ALK 阳性间变性大细胞淋巴瘤新疗法

• 批准号: 22K07821
• 负责人: 深野 玲司
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07821/
• 关键词: 未分化大細胞リンパ腫; ALK陽性; ALK阻害薬; 遺伝子解析; 悪性リンパ腫

①「再発又は難治性ALK陽性未分化大細胞リンパ腫患者を対象としたCH5424802の第Ⅱ相試験（アレクチニブ医師主導治験）」に参加した小児・成人のうち、腫瘍の保存検体が確保できた9症例においてリンパ腫生検組織（パラフィン包埋ブロック；FFPE）を収集した。FFPE標本の病理組織像について、山口大学分子病理学　伊藤浩史（研究協力者）と共同で確認を行い、FFPE標本から腫瘍細胞のDNAを抽出した。② ①で抽出したDNAを用いて、ALK遺伝子のエクソン23、24、25領域のDNAをpolymerase chain reaction (PCR) にて増幅し、サンガー法によるダイレクトシーケンスを行った後に塩基配列を確認した。エクソン23領域では良好にDNAの増幅を認めたが、アレクチニブ耐性を示した症例に特異的な遺伝子変異を認めなかった。エクソン24、25についてはPCRでDNAを増幅したが、ノイズが多く発生したため塩基配列の特定が困難であった。ダイレクトシーケンスでは変異細胞のバリアントアリル頻度が低い場合は変異を検出できないことを考慮して、次世代シーケンサーによるアンプリコンシーケンス解析を行った。③ ALK遺伝子の全領域にあたるエクソン1から29までを増幅し、ライブラリー作製した後にアンプリコンシーケンス解析を行った。アレクチニブを投与中に再発を認めた際に腫瘍組織生検を実施した1症例において、アレクチニブが結合するチロシンキナーゼドメイン内に十分なread countを有するアミノ酸変異を伴う遺伝子変異を認めた。この変異のVAFは24%であり、read countとともに適正に解析が行われていることを示していると判断した。この変異とALK阻害薬の感受性に関する報告はこれまでになく、新しい知見である可能性が考えられた。

(1) The second phase of CH5424802 for patients with relapsed and refractory ALK-positive undifferentiated large cell tumors was conducted in children, adults, and tumor preservation to ensure the collection of 9 cases of tumor tissue (FFPE). FFPE, Department of Pathology, Hiroyuki Ito, Yamaguchi University (research collaborator), confirmed that DNA from tumor cells was extracted. (2) DNA polymerase chain reaction (PCR) in the 23, 24, and 25 regions of DNA extracted from DNA samples was amplified by PCR and confirmed by DNA sequencing. The 23-year-old man's DNA was found to have increased in size and tolerance. 24, 25, 26, 27, 28, 29, 29, 20, 20, 21, 29, 20, 21, 21, 22, 21, 22, 23, 23, 24, 25, 24, 25, 25, 26, 26, 27, 27, 29, 29, 2 In the case of low frequency, low frequency, 3. ALK gene analysis in the whole field In the case of tumor tissue development, the number of read counts in the tumor tissue was increased by increasing the number of read counts. The difference is 24%. The report on the susceptibility of ALK to harm is based on the possibility of new knowledge.