炎症性腸疾患予防・治療法開発を目指した小腸絨毛上皮細胞shedding機構の解析

分析小肠绒毛上皮细胞脱落机制，寻找炎症性肠病的防治方法

基本信息

批准号：
22K08045
负责人：
松岡洋祐
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka International Cancer Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

小腸絨毛上皮細胞の細胞死は生理的条件下では適切な頻度で絨毛先端部のみで起こる。細胞死の「場所」、「頻度」を規定する制御機構の破綻が炎症性腸疾患の発症に結びつくと考え、これら制御機構を担う特異的シグナルカスケードの解明を目指している。「場所」の規定に大きく関与すると考えられる活性型MAP3K1を特異的に認識できる抗体を入手することができ、小腸粘膜器官培養系を用いた実験から、絨毛先端部に活性型MAP3K1が存在することを確認できた。また、細胞死を阻害する薬剤PDで小腸上皮細胞を処理すると活性型MAP3K1が減少することも確認でき、活性型MAP3K1 が細胞死に関与する可能性が示唆された。一方、予想に反して、MAP3K1はPDの直接の標的ではなく、間接的に阻害されている可能性を示唆する結果が得られたため、MAP3K1と相互作用するタンパク質を検出することが重要課題となった。MAP3K1近傍に存在するタンパク質を特異的にビオチン化し、回収、検討する、AirIDシステムを用いる予定で、必要なベクター等は準備できた。この実験を行うために小腸絨毛上皮細胞を単層培養する条件検討を行っている。MAP3K1と相互作用するタンパク質の中にはPDの直接標的タンパク質等、細胞死に関与するシグナルカスケードの構成タンパク質が含まれているはずで、制御機構の解明が進展することが期待される。「頻度」を規定する因子としてRIPK1を見出してきたが、その活性制御機構の一面が明らかとなったので、論文にまとめ投稿、査読中である。

小肠绒毛上皮细胞的细胞死亡仅在生理条件下以适当的频率出现在绒毛的尖端。目的是阐明在定义细胞死亡的“位置”和“频率”的控制机制中起作用的特定信号级联，因为它认为控制机制的失败会导致炎症性肠病的发作。可以特别识别活动MAP3K1的抗体，这被认为是“位置”调节中的主要因素，并且使用小肠粘膜器官培养系统进行实验证实，在绒毛尖端证实了活动的MAP3K1。此外，已经证实，用抑制细胞死亡的药物PD处理小肠上皮细胞可降低活性MAP3K1，这表明活性MAP3K1可能与细胞死亡有关。相反，与期望相反，结果表明MAP3K1不是PD的直接靶标，并且可以间接抑制，这是检测与MAP3K1相互作用的蛋白质的重要问题。我们计划使用AIRID系统来特异性生物素基蛋白，位于MAP3K1附近，恢复和研究，并且已经制备了必要的矢量等。为了进行此实验，研究了培养小肠绒毛上皮细胞的条件。与MAP3K1相互作用的蛋白质应包括构成与细胞死亡有关的信号级联反应的蛋白质，例如用于PD的直接靶蛋白，预计调节机制的阐明将进展。我们已经发现RIPK1是定义“频率”的因素，并且由于其活性控制机制的一个方面已经变得清晰，它已被编译成纸张，目前正在审查中。