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間期細胞核抽出液中に存在する微小核を誘導する因子の解析

间期细胞核提取物中诱导微核的因素分析

基本信息

批准号：
07780625
负责人：
松岡洋祐
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780625/
关键词：
細胞分裂微小核クロマチン

项目摘要

間期核を特徴づける蛋白質を探すために、「もし間期核特異的な蛋白質が存在した場合、それを分裂期の細胞に注入すれば、細胞分裂の進行に何らかの影響を与えるはずである」、という着想に基づいてウシ肝細胞核のクロマチンを分画し、ラットカンガル-腎由来の細胞であるPtK2細胞に注入した。その結果ヒストンH2A,H2Bを含む画分中に微小核形成を誘導する蛋白質性因子が存在することがわかったので、本年度はその精製、遺伝子のクローニングを試みた。微小核誘導活性と挙動をともにする分子量25kDaの蛋白質が精製できたので、その部分アミノ酸配列を決定したところクロマチン蛋白質の一種であるマクロヒストンH2AのC末端部分であることが判明した。そこでマクロヒストンH2Aの全長およびC末端25kDa部分をPCR法によりヒトcDNAライブラリーより得て大腸菌内で蛋白質として発現させた。それぞれの蛋白質を精製し分裂期細胞に注入したが、微小核は形成されなかった。そこでC末端部分の蛋白質をマウス及びウサギに免疫し特異抗体を調製した。得られた抗体は確かにウシ肝核クロマチン画分の25kDa蛋白質を認識し、この蛋白質を画分中から吸収することもできた。しかし、25kDa蛋白質吸収後の画分にも活性は存在したため精製した蛋白質は微小核誘導因子ではないことがわかった。以上の結果から微小核誘導因子は活性画分中にメジャーに含まれる25kDa蛋白質ではなく、より微量に含まれる蛋白質であることがわかった。現在、大量のウシ肝核から精製を行う方法及びDNAセルロースカラム等のアフィニテイーカラムを用いた精製法を検討中である。

Interphase nuclear characterization of proteins: "Interphase nuclear specific proteins exist in cells during division, and how cell division proceeds";"Interphase nuclear specific proteins exist in cells during division." The results showed that H2A and H2B contained protein factors that could induce micronucleus formation in the cell. This year, they were refined and tested. A protein with A molecular weight of 25kDa was purified and its partial acid alignment was determined. The full-length and C-terminal 25kDa portion of H2A were detected by PCR. The protein is purified and injected into the cell during division, and the micronucleus is formed. The C-terminal part of the protein is modulated by specific antibodies. The antibody was identified as a 25kDa protein in the liver nucleus, and the protein was detected in the liver. The 25kDa protein was purified by micro-nuclear induction factor. The above results show that the activity of micro-nuclear inducible factor is very high, and the protein content is very low. At present, a large number of liver nuclear purification methods and DNA purification methods are discussed.